【2017年整理】版的分子细胞生物学研究方法-期末.docVIP

陈瑞川 （1）Gene transferto get stable cell line Transient（短暂的 ） transfection 1. Liposome（脂质体）-mediated gene transfer: Lipofectamine（脂质体） transfection 2.Ca3(PO4)2 –mediated gene transfer 3.PEI（聚乙二胺）-mediated gene transfer 4. Electroporation（电穿孔） B. Stable transfection Adenovirus infection（腺病毒感染） 2.Retrovirus infection（反转录病毒载体法） 3.Lentivirus infection（慢病毒载体转染法） 4.Co-transfection. （2）How to get Stable cell line 1.Infection or co-transfection 2. Antibiotics selection 3. Colonies growth 4. Expression detection 5. Cell line storage （3）Homology search of existing cDNA data bases GenBank Blast NCBI Blast Home Page:/BLAST/ Go to Protein Blast Page Paste your protein sequence or enter accession number of your protein into the box Usually select Protein-protein Blast. AK056946 Homo sapiens cDNA FLJ32384 fis, clone SKMUS1000104, weakly similar to Homo sapiens mRNA for HEXIM1 protein,complete cds. 俞春东 什么是近交系小鼠？它们有什么特性？有哪些常用的近交系小鼠？ 答：近交系小鼠：是经连续20代（或以上）的全同胞兄妹交配（或亲代与子代交配）培育而成的小鼠，品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对共同祖先。 特性： 1.基因位点的纯合性（Homozygosity） 近交系动物中任何一个基因位点上纯合子的概率高达99％，因而也能繁殖出完全一致的纯合子后代。 2.遗传组成的同源性（Isogenicity） 品系内所有动物个体都可追溯到一对共同祖先，个体在遗传上是同源的，基因型完全一致 3.表型的一致性（Uniformity） 由于基因型的一致，近交系个体的表型也是相同的，在实验中用较少的近交系动物就可获得具有统计意义的结果。 4.对外界因素的敏感性（Sensitivity） 由于近交系某些生理功能的稳定性降低，对外界环境因素变化的反应更为敏感，这使近交系更容易被制备成疾病模型动物。供研究使用。 5.遗传特征的可辨性（Identifiability） 每个近交系都有自己的标准遗传概貌，选择适当的遗传监测方法，即可分辨各个近交系。 6.遗传组成的独特性（Individuality） 每个近交系都具有独特的遗传组成和独特的生物学特性。由于这一特点，采用某近交系所作的实验结果往往不直接代表整个种属的反应，而必须在多个近交系作动物实验，以增加其代表性。 7.分布的广泛性（Extensity） 同一品系在不同地区不同国家都广泛存在，引种方便并利于研究结果的交流。 8.背景资料的可查性（Accessibility） 具有一份完整的研究背景资料，便于实验设计和结果分析。 国内外常用近交系小鼠 1. BALB/c系 （1）遗传背景：①起源：Dowell于1913年开始维持的白化小鼠，从1923年开始近亲交配，1932年Snell获得其 26 代近交系。1985年180代从NIH引到IMLAS。②近交代数：180(美国 NIH1985)。③毛色和毛色基因：白化，AA、bb、cc、DD。 ④主要亚系为BALB/ccd, BALB/cJ, BALB/cAnN等。 （2）特性：乳腺癌发病率低，与其他品系相比血压较高，对慢性肺炎敏感，对放射线特别敏感，繁殖期长。 （3）应用：广泛应用于肿瘤学、生理学、免疫学、核医学和单克隆抗体等研究中。 2. C57BL系 毛色 黑色（隐性） （1）遗传背景：①起源：1921年Little由Abby Lathrop得到动物后开始近亲交配，育成数个近交