【2017年整理】用IFN-α2b和TGF-β1处理HCC细胞株：Wnt-β-联蛋白途径与Smad信号途径在肝细胞癌中是否有联系.docxVIP

摘要 Wnt/β-联蛋白途径在肝细胞癌（HCC）中通常是失控的。活化的β-联蛋白在细胞溶质和细胞核中堆积，并与诸如TCF4这样的TCF/LEF因子形成核复合物。最近发现干扰素α（IFN-α）在HCC的预防和治疗方面可能有潜在疗效。转化生长因子-β1（TGF-β1）是一种凋亡介质，通过Smad蛋白发挥作用。Wnt/β-联蛋白与TGF-β1/Smads途径之间相互作用的一个方式，就是Smad与β-联蛋白/TCF4相结合。在本研究中，我们分析了IFN-α2b和TGF-β1作用于Wnt/β-联蛋白途径产生的影响，对Smads蛋白水平的影响，对HepG2/C3A和Huh7细胞株中β-联蛋白/TCF4/Smads之间相互作用，（细胞的）增殖以及（细胞的）凋亡的影响。IFN-α2b和TGF-β1通过减少β-联蛋白与Frizzled7受体蛋白的含量，并与β-联蛋白/TCF4复合物相互作用，来减弱Wnt/β-联蛋白信号。在这样处理过后，C3A细胞株中截顶β-联蛋白（Truncated β-catenin）的形成也减少了。这两种细胞因子都可以减少Smad蛋白，以及它们与TCF4的相互作用。细胞对这两种细胞因子的总体反应就是增殖减少，凋亡增加。使用能提高β-联蛋白水平的Wnt3a处理细胞后，与未经处理的细胞相比，Smad蛋白的含量也增加了。总而言之，证明了在野生型HCC细胞株和截顶β-联蛋白HCC细胞株中，IFN-α2b和TGF-β1通过充当Wnt/β-联蛋白途径的介质而发挥作用。因此，抑制β-联蛋白/TCF4/Smad复合物的形成可能对延缓肿瘤的形成有关键性作用。在HCC患者的潜在治疗方案中，IFN-α2b和TGF-β1可能十分有用。 1.简介 在肝细胞癌（HCC）的始动和维持过程中，Wnt/β-联蛋白途径是最常失控的途径之一。这一途径在胚胎发育过程和成人组织的动态平衡中起着核心作用。在正常情况下，没有Wnt受体配体，β-联蛋白在细胞膜上与E-钙黏着蛋白形成复合物。另外，细胞质中游离的β-联蛋白被一种破坏性复合物识别并磷酸化，这种复合物由结肠息肉腺瘤蛋白（原文为adenomatous polyposis coli，直译为结肠息肉腺瘤，但是无论如何跟上下文不符合，百度一下，酌情在后面加个protein，这就对了。原文省略得太厉害了），轴蛋白（axin，字典上查不出来，百度一下才知道），糖原合成激酶3β（GSK-3β），以及酪蛋白激酶1（CK1）组成。在这一复合物中，最初由CK1将β-联蛋白45位上的丝氨酸磷酸化，然后是GSK-3β将41位上的苏氨酸，37位上的丝氨酸，以及33位上的丝氨酸残基磷酸化。然后，磷酸化的β-联蛋白复合物被识别，并被泛素化和蛋白酶体（proteasome）降解。位于细胞表面的Wnt受体复合物是由一种7次跨膜域Frizzled蛋白，和LDL-受体蛋白家族中的一种单向跨膜蛋白所组成。当Wnt残基与Wnt受体复合物结合时，便转导了一个灭活β-联蛋白破坏性复合物的信号，使得未被磷酸化的β-联蛋白在细胞质和细胞核中聚集。在这时的细胞核中，β-联蛋白与DNA组蛋白中的TCF/LEF家族成员形成复合物，从而调节大量的目标基因的转录。 已有报导，人类HCC细胞中Wnt/β-联蛋白途径的基因修饰会引起这一信号转导过程的异常活化，其表现就是转录后β-联蛋白的稳定化。最常见的改变是β-联蛋白被GSK-3β和CK1磷酸化的部位所对应的基因区域的活化突变。不过，该途径中的其它部分也可以产生改变。例如，已有报导称在人类HCC细胞中发现Frizzled7受体的过度表达，并提示这种过度表达跟野生型β-联蛋白的稳定化和聚集有关。 另一方面，转化生长因子-β1（TGF-β1）在正常肝细胞和癌变肝细胞中都是一种重要的生理学上的凋亡介质，它通过两种跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶，也就是所谓的Ⅰ型和Ⅱ型受体，来实现其不同的功能。配体活化的Ⅱ型受体与Ⅰ型受体结合，磷酸化Ⅰ型受体，并活化Ⅰ型受体，在这一过程中，首先是转导信号的Smad家族中的Smad2和Smad3蛋白依次被磷酸化，然后这些被磷酸化的Smad蛋白与Smad4蛋白结合，进入细胞核，与细胞核转录因子结合并/或直接与DNA结合，从而调控转录。抑制性的Smad7蛋白与TGF-β1受体牢固结合，干扰配体诱导的Smad2和Smad3蛋白的磷酸化过程。在TGF-β1刺激后，Smad7蛋白从细胞核转移到质膜，发挥其抑制作用，在TGF-β1信号通路中起到一个自调控负反馈作用。 Wnt/β-联蛋白途径和TGF-β1/Smad途径在胚胎发育过程中共同调控图式形成（pattern formation 图式形成，发育过程中控制胚胎细胞的行为使其在正确的空间位置上形成特定的结构——译者注），同时调控肿瘤的进展过程。很多团体已经研究了在胚胎发