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* 生物电子显微技术 电子显微镜的基本知识 电子显微镜的类型及技术特征 透射电子显微镜 扫描电子显微镜 分析电子显微镜 双束电子显微镜 扫描探针显微镜 电镜生物样品制作技术 超薄切片制作技术 负染色技术 扫描电子显微镜样品制备技术 冷冻制样技术 第一章 电子显微镜的基本知识 1－1.电子显微镜的发展概况 1－2.电子显微镜的基本知识 1－1.电子显微镜的发展概况 一、电子显微镜的发明与发展： 科学理论的发展： 1924年物理学家（德布罗伊）证实了： 电子与光子一样，具有波动性； 1926年物理学家布施发表了研究成果： “关于带电粒子在轴对称电场、磁场中具有聚焦作用” 1.电子显微镜发明的必然性与可能性 裸眼观察物体： 生物体的机体、器官、组织 光学显微镜观察： 器官、组织、细胞 探索更微小的生命形式：病毒 超显微术 人类的梦想与科学理论的支撑 促成了电子显微镜设计思想的产生！ 2.电子显微镜的诞生： 电子显微镜于1931年，在德国柏林大学高压实验室由 Knoll 和RUska研制成功，证实了由电子束为光源、电 子透镜组成的电子光学系统，可以对物体放大成像。 1932年宣告电子显微镜诞生。分辨率50纳米 。 1939年,Ruska在西门子公司研制生产了世界上第一系列 商品透射电镜，分辨率仅10nm，40台； 20世纪40年代，美国的希尔用消像散器补偿电子透镜的旋转 不对称性，使电子显微镜的分辨本领有了新的突破，逐步达 到了现代水平。 1935年，Knoll首先提出了扫描电镜的设计思想和工作原理； 1942年，M.Mullan在剑桥大学研制成功世界上第一台 扫描电镜实验室装置； 1965年由剑桥大学仪器公司生产出世界上第一批 商品扫描电镜，分辨率50~100nm，放大倍数仅1万倍。 初级阶段的电镜：功能单一，电子管元件，体积庞大，操作复杂。 3.电子显微镜发展的成熟阶段 20世纪60~80年代， 电子显微镜的理论研究 及生产技术达到成熟的时期。 分辨率达到6.0nm;放大率达到30万倍。 分辨率达到0.2nm;放大率达到80万倍。 特点：晶体管时代，功能多样化，操作较复杂！ 4.现代电子显微镜 高性能、多功能、结构紧凑、微机化控制/操作 操作系统微机化 二、我国电镜事业的发展概况 1.我国电镜的研制概况： 2.我省电镜应用概况：太原理工大学，山西医科大学 三、电子显微应用技术的概况： 始于20世纪50年代； 1959年中科院精密仪器研究所研制成功第一台透射电镜XD-100型； 1965年中科院科仪厂研制成功DX-3型透射电镜，分辨率达到0.3nm； 1977年上海新跃仪表厂研制出DXB-12型透射电镜，分辨率达到0.2nm; 中科院科仪厂自KYKY-1000B以后，KYKY-2800型，KYKY-3800型扫描电镜。 常规超薄切片技术 常规扫描制样技术 冷冻复型技术 细胞化学技术：酶的细胞化学 免疫电镜技术 负染色技术：快速诊断 现代电镜将超微结构观察与加工一体化 一、电子显微镜的计量单位： 1cm 1mm 100μm 10μm 1μm 100nm 10nm 1nm 0.1nm 电镜观察（nm) 光镜观察(μm) 肉眼观察(mm) 分子和原子 核酸和 蛋白分子 病毒 细胞器 细菌 细胞 动、植物器官 1μm=10-6m 1nm=10?=10-9m 1mm=10-3m 1mm=10-3m 1μm=10-6m 1－2.电子显微镜的基本知识 显微结构 超微结构 二、电子显微镜的照明源—电子束 1.电子枪的结构： 阳极 栅极 阴极 高压 偏 压 0V 3V3A 阴极：钨灯丝，产生电子 栅极：控制电子束 阳极：加速电子运动 2.电子束的产生 加灯丝电压使灯丝加热， 尖端温度升高 到2227℃时逸出电子， 当温度升高到2480℃时逸出大量电子， 这些自由电子在高压作用下， 形成高能电子束。 三、电子透镜系统 1.理论依据：1926年，德国物理学家布施发现：一切带 电粒子在旋转轴对称磁场或电场中，运动轨迹可以被 折射而会聚。电子束聚焦的关键理论。 2.电子透镜的类型 电子透镜 静电电子透镜：由静电场组成的三级电子枪 磁电子 透镜 恒磁透镜：用恒磁体激磁的透镜 电磁 透镜 螺线管线圈：磁场非常弱 包壳透镜：磁性材料封闭线圈，聚光镜 极靴透镜：高导磁性材料极靴，使磁场 高度集中。物镜、投影镜等强透镜。 四、电子透镜的像差： 像差的主要类型 电子光学系统与理想光学系统成像的差别，称为像差。 1.球差：透镜缺陷使近轴磁场与边缘磁场对电子束偏