分析化验_分析规程_工业循环冷却水中异养菌的测定..doc

工业循环冷却水中异养菌的测定 1 适用范围 本规程适用于工业循环冷却水中异养菌的测定，还适用于原水，生活用水及其他水中异养菌的测定。 2 引用标准 GB 603 化学试剂 试验方法所用制剂及制品的制备。 GB 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 方法概要 本法采用平皿计数技术在29±1℃培养72h来测定循环水中的异养菌总数。 4 试剂和材料 本试验测定方法中，除特殊规定外，应使用分析纯试剂和符合GB 6682中三级水规格的水。 4.1 牛肉膏(生化试剂)； 4.2 蛋白胨(生化试剂)； 4.3 氯化钠(GB 1266)； 4.4 琼脂(生物试剂)； 4.5 氢氧化钠(40g/L)溶液：称取10g氢氧化钠溶解在一定水中，加水定容到1000mL，搅匀。 4.6 盐酸溶液(1+11)：量取浓盐酸10mL 溶解到110mL 水中，混匀。 4.7 乙醇溶液75%(V/V)：量取394.7mL 95%乙醇溶解到一定量水中，加水稀释到500mL，混匀。 4.8 牛皮纸： 4.9 医用脱脂棉； 4.10 医用脱脂纱布； 5 仪器和设备 5.1 无菌箱(室)或超净工作台； 5.2蒸汽压力灭菌器； 5.3 生化培养箱； 5.4电热干燥箱(温度可控制在60～280±2℃)； 5.5刻度吸管1mL； 5.6 刻度吸管5mL； 5.7刻度吸管50mL； 5.7 磨口锥形瓶100mL； 5.8 容量瓶1000mL； 5.9 培养皿ф90mm； 5.10锥形瓶500mL； 5.11搪瓷量杯1000mL； 5.12取水样瓶500 mL； 6 试验前的准备 6.1 培养基的制备称取下列试剂：牛肉膏 3.0；蛋白胨 10.0g；氯化钠 5.0g；琼脂 15.0g。将上述试剂加水约950mL，在电炉上加热溶解后，趁热用四层医用脱脂纱布过滤于搪瓷量杯中，并用热水补充至1000mL。用氢氧化钠溶液(4.5)或盐酸溶液(4.6)调节pH值至7.2±2，并分装在500mL 锥形瓶中，每瓶分装量不超过其总容量的2/3。塞上棉塞，用牛皮纸把瓶口包好，用蒸汽压力灭菌器121±1℃灭菌15min。 6.2 无菌稀释水制备 6.2.1 生理盐水的配制：称取8.50g氯化钠溶解在1000mL 水中，混匀。 6.2.2 将生理盐水(6.2.1)分装在100mL 磨口锥形瓶中，每个锥形瓶塞子和瓶口间插入一小纸片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力灭菌器121±1℃灭菌15min。 6.3 刻度吸管的灭菌。 6.3.1 将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉，棉花量要适宜，长度大约10～15min，棉花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。 6.3.2 每支刻度吸管用1条约40～50mm宽的牛皮纸条，以45°左右角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，粗端用多余的纸条折叠打结，不使散开，标上量度，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于160±2℃灭菌2h。 6.4 培养皿的灭菌将洗净并烘干后的培养皿10个左右叠在一起，用牛皮纸卷成一筒，置电热干燥箱中，于160±2℃灭菌2h。 6.5取水样瓶的灭菌:将洗净并烘干后的取样瓶,于160±2℃灭菌2h。 7 测定步骤 7.1 样品的采集 7.1.1 打开水阀，用取样瓶取水样。 7.2 无菌箱(室)灭菌把试验所用的无菌稀释水，无菌培养皿、无菌吸管等用品放入无菌箱(室)内，打开紫外线灯灭菌30min。 7.3 水样的稀释和接种 7.3.1 水样(7.1.1)放入灭过菌的无菌箱(室)(7.2)中，立即用75%(V/V)乙醇溶液浸泡的医用脱脂棉球擦手，点燃无菌箱(室)内的酒精灯。7.3.2.～7.3.7的操作应在无菌箱(室)内的火焰区进行。 7.3.2 选择适宜的稀释度，应使最后一个稀释度接种后平皿上生长的菌落数小于300个。在空白稀释水样瓶(6.2)上标上稀释度数。 7.3.3 用10倍稀释法稀释水样，即用5mL 无菌吸管(6.3)吸取5mL 水样(7.1.1)注入到45mL 空白稀释水中充分摇匀，此时稀释度为10-1。 7.3.4 另取一支5mL 无菌吸管吸取5mL 稀释度为10-1水注入到第二个稀释水中，充分摇匀，此时稀释度为10-2。依次类推，直至需要的稀释度为止。 7.3.5 将不同稀释度的水样分别接种到无菌培养皿(6.4)中，每个稀释度重复接种3～5皿，每皿接种1mL，接种时左手手撑托住培养皿，大拇指和食指轻轻将培养皿盖提起，使右手中的吸管恰好插入，吸管与培养皿底成45°角相接，移开吸管时吸管不宜再碰到培养皿，接种时间不宜超过4s，每接一个稀释度更换一支无菌吸管。 7.3.6 另取一组培养皿不接水样，作为空白。 7.3.7 将灭过菌的培养基(6.1)冷却至45±1℃，按(7.3.5)掀开培养皿盖，将培养基灌入培养皿