引物设计实例分析..pptVIP

引物设计实例分析 引物设计基本原则 引物长度（primer length） 产物长度（product length） 序列Tm值 (melting temperature) G+C含量（composition） 引物二聚体及发夹结构 （duplex formation and hairpin） 阅读框 2.产物的长度 扩增片段长度为100~600碱基对. 3. Tm值 引物的Tm值一般控制在55-60度, 尽可能保证上下游引物的Tm值一致,一般不超过2度. 如果引物中的G+C含量相对偏低,则可以使引物长度稍长,而保证一定的退火温度. Tm=2(A+T)+4(C+G) 1.打开软件，调入序列 2、选择路径，选择序列文件名，加入右框 3、序列文件显示如图，点击“primer”； 4. 按照引物设计的原理，设定引物的各种参数，点击“确定”进行引物搜寻 5、等待引物搜寻，显示结束后，点击“确定”。 6、按照搜寻结果显示，逐条分析，在主窗口中检查该引物对的二级结构情况，依次筛选 Primer Premier5的引物评价窗口 引物要求 PCR扩增GFP GFP两边添加BamHI酶切位点 保证NR1的阅读框不改变 第二步：GC比值；Tm值 第三步：酶切位点 第五步 保护序列 Primer1: 5’ GCGGgg