【2017年整理】微生物限度验证观察记录.docVIP

沉香化滞丸微生物限度方法学验证及报告 1、供试品 检品名称：沉香化滞丸 规格：6g/袋×10袋/盒 产品批号：1304230 1304240 1304210 生产单位：河南爱民药业集团股份有限公司 检验依据：《中国药典》2010年版一部 2、微生物限度验证所用菌种 大肠埃希菌〔CMCC(B)44102〕 枯草芽孢杆菌〔CMCC(B)63501〕 白色念球菌〔CMCC(F) 98001〕 金黄色葡萄球菌〔CMCC(B)26003〕 3、方法： 《中国药典》2010年版一部微生物限度检查中薄膜过滤法验证（附录XⅢC） 3.1菌液制备 (1) 取经37℃培养18~24h，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草杆菌的营养肉汤培养物1ml+9ml0.9%盐水，10倍稀释至10-5~10-7，细菌数约为50~100cfu/ml，做活菌计数备用。 (2) 经25 ℃培养18~24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml+9ml0.9%盐水10倍稀释至10-5 ~10-7，菌数约为50~100cfu/ml，做活菌计数备用。 3.2结果见表1、表2 表1 细菌计数结果 菌种 大肠埃希菌 （10-7） 金黄色葡萄球菌 （10-6） 枯草芽孢杆菌 （10-5） 计数 （CFU） 72 76 85 91 76 78 均值 （CFU） 74 88 77 表2 霉菌计数结果 菌种 白色念球菌（10-5） 计数（CFU） 69 71 均值（CFU） 70 4、供试液的制备 4.1取供试品10g，置研钵中研细，慢慢加入45℃PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，边加边搅拌，作为1：10的供试液，分别人工污染上述四种代表试验菌株。 5、回收率测定： 5.1试验组 取1ml 1：10供试液，分别加入含菌数为50～100cfu的试验菌1ml，分别注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基（细菌）与玫瑰红钠培养基（霉菌），细菌：33℃培养72小时，霉菌、酵母菌：26℃培养120小时。 5.2菌液组 取含菌数为50～100cfu的试验菌各1ml，分别注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基（细菌）与玫瑰红钠培养基（霉菌），细菌：33℃培养72小时，霉菌、酵母菌：26℃培养120小时。 5.3供试品对照组： 取1ml 1：10供试液，分别注入平皿中，立即倾入营养琼脂培养基（细菌）与玫瑰红钠培养基（霉菌），细菌：33℃培养72小时，霉菌、酵母菌：25℃培养120小时。 5.4稀释剂对照组： 取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液1ml，加入1ml含菌数为50～100cfu/ml的菌悬液，立即倾入营养琼脂培养基（细菌）与玫瑰红钠培养基（霉菌），细菌：33℃培养72小时，霉菌：26℃培养120小时 验证试验结果见记录 微生物限度验证观察记录(1) 品 名 沉香化滞丸 批 号 1304230 检验日期 2013.04.21 报告日期 2013.04.24 大肠埃希菌培养时间 菌落计数 试验组 菌液组 供试品对照组 稀释剂对照组 4月21 日17 时10 分至4 月22 日17 时10 分 平皿1 平皿2 平皿1 平皿2 平皿1 平皿2 平皿1 平皿2 68 71 83 86 4 4 73 76 4月22 日17 时10 分至4 月23 日17时10 分 70 74 88 88 4 4 75 77 平均 72 88 4 76 回收率 77% / / 86% 金黄色葡萄球菌培养时间 菌落计数 试验组 菌液组 供试品对照组 稀释剂对照组 4月21 日17 时10 分至4 月22 日17 时10 分 平皿1 平皿2 平皿1 平皿2 平皿1 平皿2 平皿1 平皿2 76 79 87 92 8 6 72 74 4月22 日17 时10 分至4 月23 日17时10 分 81 85 90 94 8 8 76 78 平均 83 92 8 77 回收率 82% / / 84% 白色念珠菌培养时间 菌落计数 试验组 菌液组 供试品对照组 稀释剂对照组 4月21日17时10分至4月22日 17时10分 平皿1 平皿2 平皿1 平皿2 平皿1 平皿2 平皿1 平皿2 63 65 78 74 3 4 69 72 4月22日17时10分至4月23日17时10分 64 66 80 76 4 5 71 72 4月23日17时10分至4月24日17时10分 65 67 84 78 5 5 73 73 平均 66 81 5 73 回收率 75% / / 90%/ 枯草牙孢杆菌培养时间 菌落计数 试验组 菌液组 供试品对照组 稀释剂对照组 4月21日17时10分至4月