【2017年整理】生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔.docVIP

生物反应器体外构建组织工程化尿路肌性管腔 王 营，傅 强，赵仁淹(上海交通大学附属第六人民医院泌尿外科，上海市 200233) 文章亮点： 1 理想的组织工程尿道替代物应具有良好的力学特性，静态培养的尿路肌性管腔强度不佳。 2文章的创新性在于应用生物反应器体外动态构建组织工程化尿路肌性管腔，应用生物反应器引入力学因素明显改善了组织工程化尿路肌性管腔的组织结构和胶原分布，为应用组织工程技术修复尿道缺损提供了理想的组织替代来源。 关键词： 组织构建；组织工程；脂肪干细胞；生物反应器；聚羟基乙酸；动态力学刺激培养；静态培养；国家自然科学基金 主题词： 干细胞；组织工程；生物反应器，尿道；流式细胞术 基金资助： 国家自然科学基金资助项目；上海市自然科学基金资助项目(09ZR1424100) 摘要 背景：理想的组织工程尿道替代物应具有良好的力学特性，足以承受长时间的尿液排泄冲击，而静态培养的尿路肌性管腔强度不佳。已有研究表明，力学刺激能够促进细胞生长和细胞外基质的分泌。 目的：探讨生物反应器内构建组织工程化尿路肌性管腔的可行性。 方法：酶消化法获取脂肪干细胞，经体外培养和扩增后，流式细胞技术检测细胞表面抗原，将脂肪干细胞接种于聚羟基乙酸上，形成细胞-材料复合物，体外培养1周后，将其置于生物反应器内培养，实验组予以动态力学刺激培养；对照组为静态培养，先采用基础培养基培养3周，而后用成肌诱导培养液诱导4周，行大体观察及组织学检测。 结果与结论：流式细胞仪检测细胞表面CD90，CD44，CD105表达率分别为99.42%，98.12%，93.27%；CD34，CD45表达率分别为4.92%和0.38%，实验组培养的肌性管腔色泽明亮，管腔圆润，免疫组化染色显示，细胞材料复合物在诱导4周后，细胞表达结蛋白和α-平滑肌肌动蛋白阳性，细胞材料复合物胶原成分多。对照组构建的肌性管腔色泽暗淡，管腔轻度塌陷，细胞材料复合物胶原成分较少。提示脂肪干细胞复合聚羟基乙酸材料在生物反应器内动态培养可构建具有良好结构的尿路肌性管腔。 165-170. Constructing a tissue-engineered muscular conduit of urinary tract in bioreactor Wang Ying, Fu Qiang, Zhao Ren-yan (Department of Urology, the Sixth People’s Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University, Shanghai 200233, China) Abstract BACKGROUND: Ideal tissue-engineered urinary tract should have good mechanical properties to bear long-term attack of urine and excretion. Muscular conduit of urinary tract in static culture exerts poor strength. It is reported that mechanical stimuli promote cellular growth and secretion of extracellular matrix. OBJECTIVE: To investigate the feasibility of constructing tissue-engineered muscular conduit of urinary tract in bioreactor. METHODS: Adipose-derived stem cells were harvested by collagen enzyme method. After series culture and expansion in vitro, flow cytometric analysis was carried out to detect the immunophenotypes of adipose-derived stem cells. Then the cell-polyglycolic acid complex was constructed by seeding adipose-derived stem cells on polyglycolic acid fibers. After 1 week of in vitro culture, cell-polyglycolic acid complex w