第八章微生物的遗传变异和育种解决方案.ppt

QUESTION 证明DNA（RNA）是遗传物质的三个经典实验分别是什么？ 基因重组：凡把两个不同性状个体内的遗传基因转移到一起，经过遗传分子间的重新组合，形成新遗传型个体的方式。 作用：重组可使生物体在未发生突变的情况下，也能产生新遗传型的个体。 重组与杂交的关系： 重组是分子水平上的一个概念，可以理解成是遗传物质分子水平上的杂交。 而一般所说的杂交（hybridization）则是细胞水平上的一个概念。 杂交中必然包含着重组，而重组则不限于杂交这一形式。 真核微生物中的有性杂交、准性杂交（parasexual hybridization）等及原核生物中的转化、转导、接合和原生质体融合等都是基因重组在细胞水平上的反映。 一、原核生物的基因重组 基因重组的方式 转化 转导 接合 原生质体融合 原生质体融合：通过人为方法，使遗传性状不同的两细胞的原生质体发生融合，并进而发生遗传重组以产生同时带有双亲性状的遗传性稳定的融合子（fusant）的过程。 适用范围：各种生物细胞都能进行原生质体融合，包括各种原核生物、真核微生物以及高等动植物和人体的不同细胞。 意义：20世纪70年代后发展的一种育种新技术，继转化、转导和接合之后一种更有效的转移遗传物质的手段。原生质体融合不仅能在不同菌株或种间进行，还能做到属间、科间甚至更远缘的微生物或高等生物细胞间的融合。 作业 1、图示影印平板培养法原理？该方法有何理论与实际应用价值？ 2、试述“Ames法”检测“三致物质”的理论依据、方法概要和优点。 1）从衰退的菌种群体中把少数个体再找出来，重新获得具有原有典型性状的菌种。 a）纯种分离； b）通过寄主体进行复壮； 2）有意识地利用微生物会发生自发突变的特性，在日常的菌种维护工作中不断筛选“正变”个体。 菌种的复壮： 二、防止衰退的措施 1）减少传代次数； 2）创造良好的培养条件； 3）利用单核体传代; 4）经常进行纯种分离，并对相应的性状指标进行检查； 5）采用有效的菌种保藏方法。 三、菌种保藏 目的：在一定时间内使菌种不死、不变、不乱，以供研究、生产、交换之用 基本原则：1、挑选典型菌种的优良纯种； 2、尽量使用分生孢子、芽胞等休眠体； 3、创造有利于休眠的保藏环境（如干燥、低温）； 4、尽可能多的采用不同的手段保藏一些比较重要的微生物菌种。 基本方法 培养基传代培养（斜面、平板） 寄主传代培养 低温（液氮、低温冰箱） 干燥（沙土管、真空干燥） 生活态 休眠态 转化过程的特点： a）对核酸酶敏感； b）不需要活的DNA供体细胞； c）转化是否成功及转化效率的高低主要取决于转化供体菌株和转化受体菌株之间的亲源关系； d）通常情况下质粒的自然转化效率要低得多 噬菌体DNA被感受态细胞摄取并产生有活性的病毒颗粒 转染(transfection)： 转染的特点：提纯的噬菌体DNA以转化的（而非感染）途径进入细胞并表达后产生完整的病毒颗粒。 二、细菌的转导（transduction） 由噬菌体介导的细菌细胞间进行遗传物质交换的一种方式 一个细胞的DNA通过病毒载体的感染转移到另一个细胞中。 细菌转导 的类型： 普遍转导 局限转导 完全普遍转导 流产普遍转导 低频转导 高频转导 局限转导与普遍转导的主要区别 溶源转变 三、接合(conjugation) 通过细胞与细胞的直接接触而产生的遗传物质的转移和重组过程。 1946年，Joshua Lederberg 和Edward L.Taturm 细菌的多重营养缺陷型杂交实验 Met+bio+thr+leu+ Met-bio-thr+leu+ Met+bio+thr-leu- [-] [-] [-] 混合培养 中间平板上长出的原养型菌落是两菌株之间发生了遗传交换和重组所致。 证实接合过程需要细胞间的直接接触的“U”型管实验（ Bernard Davis，1950 ） 接合机制(大肠杆菌的接合机制) 接合作用是由一种被称为F因子的质粒介导。 F因子的分子量通常为5×107，上面有编码细菌产生性菌毛及控制接合过程进行的20多个基因。 F因子为附加体质粒，既可以脱离染色体在细胞内独立存在，也可插入（整合）到染色体上。 F因子的四种细胞形式 a）F-菌株(“雌性”菌株)，不含F因子，没有性菌毛，但可以通过接合作用接收F因子而变成F+菌株； b）F+菌株(“雄性”菌株)， F因子独立存在，细胞表面有性菌毛。 c）Hfr菌株，F因子插入到染色体DNA上，细胞表面有性菌毛。 d）F′菌株，Hfr菌株