种子扩大培养要点.pptVIP

种子扩大培养 种子扩大培养是指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 种子扩大培养应根据菌种的生理特性，选择合适的培养条件来获得代谢旺盛、数量足够的种子。 培养良好的种子接入发酵罐后，将使发酵生产周期缩短，设备利用率提高。种子液质量的优劣对发酵生产起着关键性的作用。 优良种子应具备的条件 活力强 生理状态稳定 菌体数量浓度达到要求 无杂菌污染 适应性强，能保证稳定生产 种子质量的判定 通常测定的参数包括 pH 培养基中营养物质的含量 菌丝形态、色泽、浓度 酶活，溶解氧，尾气等 实验室制备阶段 实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此将这些培养过程称为实验室阶段的种子培养。 斜面培养基接种法 用途：常用于扩大纯种细菌及实验室保存菌种。 操作方法： 1、??以无菌操作法用接种环挑取单个菌落，自斜面底向上划一直线，然后再从底向上轻轻来回作蜿蜒划线。 2、??管口通过火焰，塞上棉塞，接种环烧灼后方可放下。置37℃温箱孵育18-24小时，取出观察斜面上菌苔生长情况。 生产车间种子的制备 孢子或摇瓶菌丝在实验室中制备好后，即可转移到种子罐中扩大培养。 种子罐的作用是使有限的数量的孢子或菌丝生长繁殖成大量的菌丝体。 种子罐的培养基虽因不同菌种而异，但其原则为采用易被菌利用的成分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐等，同时还需供给足够的无菌空气，并不断搅拌 种子扩大的级数 指制备种子需逐级扩大培养的次数，需要根据菌种的生长繁殖速率，发酵罐的容积综合确定。 一级种子二级发酵：谷氨酸棒杆菌 二级种子三级发酵：青霉菌 三级种子四级发酵：灰色链霉菌 种子罐的级数越少，越有利于简化工艺和控制，并可减少由于多次移种而带来染菌的机会。但也必须考虑尽量延长发酵罐生产产物的时间，缩短由于种子发芽、生长而占用的非生产时间，以提高发酵罐的生产率。 种龄与接种量 种龄：种子的培养时间。 接种量：移入的种子液体积和接种后培养液体积的比例。 双种：两个种子罐接种到一个发酵罐中。 倒种：一部分种子来源于种子罐，一部分来源于发酵罐。 影响种子质量的因素 原材料质量 一般情况：培养基糖分相对要少，氮源要多，无机盐所占的比例要大。种子罐和发酵罐培养基成分趋于一致也有好处，种子很快适应，但各成分的数量根据目的各自确定。 培养条件 如温度、PH值、湿度、培养时间和冷藏时间等都影响种子质量。 种子质量的控制 菌种的稳定性检查与复壮 无杂菌检查 发酵动力学 分批发酵动力学 代谢产物合成与微生物生长的关系 微生物发酵中，所消耗的底物主要用于3个方面： 合成新的细胞物质 合成代谢产物 提供能量 生长相关型 指产物的生产与细胞的生长密切相关，产物的生成是微生物主要能量代谢的直接结果。 产物通常为细胞生长必须的初级分解代谢产物，如葡糖酸等 生长部分相关型 产物是能量代谢的间接结果，不是底物的直接氧化产物，产物的生成与细胞生长部分偶联。 主要有柠檬酸、氨基酸发酵 非生长相关型 产物的生成与能量代谢没关系，与细胞生长也无直接关系，产物均为次级代谢产物，细胞进入稳定期后产物才开始大量合成。 在基质消耗和菌体生长后，菌体利用中间代谢反应来形成产物。 常用的连续培养方法有： 恒浊法 恒化法 恒浊法 是以培养器中微生物细胞的密度为监控对象，用光电控制系统来控制流入培养器的新鲜培养液的流速，同时使培养器中的含有细胞与代谢产物的培养液也以基本恒定的流速流出，从而使培养器中的微生物在保持细胞密度基本恒定的条件下进行培养的一种连续培养方式。 用于恒浊培养的培养装置称为恒浊器 用恒浊法连续培养微生物，可控制微生物在最高生长速率与最高细胞密度的水平上生长繁殖，达到高效率培养的目的 恒化法是通过控制培养基中营养物，主要是生长限制因子的浓度，来调控微生物生长繁殖与代谢速度的连续培养方式。用于恒化培养的装置称为恒化器。恒化连续培养在研究微生物利用某种底物进行代谢的规律方面被广泛采用。因此，它是微生物营养、生长、繁殖、代谢和基因表达与调控等基础与应用基础研究的重要技术手段。 连续发酵的优点： 在发酵达到稳定后，其非生产时间大大减少，设备利用效率高，生产能力大，产品质量较稳定，工艺易于实现自动化 缺点：染菌和菌种退化 如果不发生污染杂菌，不出现菌种退化，连续培养是不是能一直生产下去？ 补料分批培养的优缺点 优点 在这样一种系统中可以维持低的基质浓度，避免快速利用碳源的阻遏效应；可以通过补料控制达到最佳的生长和产物合