R2A琼脂培养基适用性检查方案解剖.docxVIP

R2A琼脂培养基适用性检查方案文件编号：VP-QC-2015-05起草人：审核人：批准人：批准日期：年月日目录1 概述12 验证目的及范围13 验证小组人员组成及职责14 验证依据25验证前准备26验证的实施27 偏差处理58 验证数据及评估59验证报告及评审510 再验证及周期511 验证文件及归档512 附件51 验证目的及范围2015版《中华人民共和国药典》中规定纯化水的微生物限度检查采用的培养基为R2A琼脂培养基。为了保证纯化水微生物限度检查的准确性和可靠性，需对该R2A琼脂培养基进行适用性检查实验。2验证方法照2015版药典非无菌产品产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌，应符合规定。3.验证小组人员组成及职责：3.1验证小组由以下部门人员组成：质量部、QC、生产部。3.2 验证小组组成及职责列表组成职责QC1. 负责起草验证方案的起草2. 负责本方案的培训3. 仪器仪表校验确认4. 负责验证的实施5. 负责数据的收集和整理6. 负责数据分析7. 负责完成验证报告质量部负责验证方案、验证报告的审核与批准负责验证现场的监督审查生产部1. 负责保障设备、器具的完好2. 负责动力系统的保障4验证接受标准4.1 被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5~2范围内，且菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致；4.2 被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。?5.验证前准备?5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证实施前）对本次验证相关人员进行培训。培训人员记录见附件1。?5.2将所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。?5.3 确认仪器仪表设施经过确认和校验，并填写确认记录。5.4 相关文件序号相关文件文件编号1DHG型电热恒温鼓风干燥箱操作规程WI-1002BSC-100-II-B2生物安全柜操作和维护保养规程WI-1013WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器使用和维护保养规程WI-1034DK型电热恒温水浴锅操作规程WI-1045HWS型恒温恒湿箱操作规程WI-1056JA2003N电子天平操作及维护保养规程WI-1067PHS-3C型PH计操作及维护保养规程WI-1088SHP-3C型低温生化培养箱操作及维护保养规程WI-1099YJ-875SDB型净化操作台的操作及维护保养规程WI-11310《培养基管理规程》WI-766.验证的实施6.1 实验材料6.1.1培养基类别培养基名称厂家批号验证培养基A2R琼脂培养基对照培养基胰酪大豆胨琼脂培养基 6.1.2 仪器设备DHG型电热恒温鼓风干燥箱、BSC-100-II-B2生物安全柜、WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器、DK型电热恒温水浴锅、HWS型恒温恒湿箱（30～35℃）、JA2003N电子天平、PHS-3C型PH计、SHP-3C型低温生化培养箱（20～25℃）、YJ-875SDB型净化操作台。6.1.3稀释剂：PH无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液6.1.4计数用培养基胰酪大豆胨琼脂培养基6.1.5验证用菌株铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]6.1.6灭菌前调节PH溶液：10%碳酸钠溶液或1mol/L氢氧化钠溶液/15%冰醋酸溶液或1mol/L盐酸溶液。6.2 验证内容6.2.1 培养基的配制灭菌过程将分装包装好的培养基分别放入灭菌器中121℃灭菌15分钟后取出。取1管已灭菌的培养基，放冷至25℃测定pH值，应在7.20.2范围内。6.2.1.4 外观性状灭菌后的培养基应对其外观性状仔细检查，如发现色泽异常、浑浊、橡胶塞被培养基沾染等，均应挑出弃去。将制备好的培养基保存在2～25℃、避光的环境中，在存放2周后，培养基外观应色泽正常，澄清透明。6.2.2菌液制备接种铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30?35℃培养18?24小时。6.2.3菌液计数（每种菌液接种2个）6.2.3.1 分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌（50～100cfu/ml）各1ml加入无菌培养皿，立即注入不超过45℃胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养48小时，计数每株试验菌平行制备2个平皿。6.2.4培养基适用性检查6.2.4.1分别取上述制备的铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，立即注入不超过45℃胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养48小时；分别计数。同时取相应的对照培养基替代被