HPLC的用步骤.docVIP

高效液相色谱法测定止痛药 由David L. Zellmer和罗伯特 - 威廉姆斯  （基于由得克萨斯州A＆M大学的玛丽安海曼的实验）  1997年4月 版本1.02（轻微的补充和修正），2000年5月 该方法 我们将使用高效液相色谱法（HPLC）分离市售的止痛药乙酰水杨酸，咖啡因和对乙酰氨基酚。 你必须选择一个产品，至少有两个在它上面的成分。 该软件包应该给你制造商组成。 在分析的结论，你可以比较你的结果，与包装上指明的。 不要以为包是正确的的。 书面报告的目的是，建立你的分析信誉。 下面给出我们分离的化合物的结构。 一个化合物已增加，水杨酸。 这种物质将我们的内部标准，将在不断的金额加入到我们所有的标准和未知的运行。 我们的色谱柱将是一个30厘米C - 18柱，在性格上比较非极性。 我们的流动相，将水，甲醇和醋酸的混合物。 通过不同的水 - 甲醇混合，我们可以控制我们的溶剂的极性。 通过改变醋酸，我们可以改变它的pH值。 在酸性条件下，我们可以期望，对乙酰氨基酚或咖啡因氮原子（两个看起来像他们可能会弱碱）拿起一个质子和成为一个高度极性的离子，而乙酰水杨酸和水杨酸（包括弱酸）继续作为弱极性分子。 另一种可能性是对乙酰氨基酚不拿起任何质子，但在自己的权利非常极性。 这可能是一个足够强大的弱酸阴离子存在羟基，如果失去一个质子，在流动相的pH。 由于“像吸引了像”我们所期望的乙酰水杨酸和水杨酸列交互举行，而对乙酰氨基酚或咖啡因通过更迅速。 现实生活中是从未相当简单，所以我们必须发挥我们的溶剂组成，运行的色谱，我们得到什么。 我们希望看到的是类似下面的模拟色谱。 3分钟，高峰期可能是对乙酰氨基酚或咖啡因，8分钟可两个氨基酸之一，但不要指望它。 你必须制定一种方法，一旦你已经达到基线分离，以确定您的峰。 这是地方标准进来，我们将准备标准溶液，对乙酰氨基酚，乙酰水杨酸，咖啡因和水杨酸。 这些都将结合创建一系列的校准解决方案，将使我们能够确定峰，峰面积和浓度的标准之间的关系是什么。 仪器 标准的实验室报告的部分原因是你已经使用的实际设备的识别和描述，所以一定要确保你“在实验室中的东西”的所有设备制造商和型号，以及源（国家的制造商，而不是）和特点（HPLC级，试剂级，一级标准等级等），化学品和其他材料。 从这里描述你的实验装置，可能会有所不同，所以不只是为您的报告中复制。 （不要复制的另一个很好的理由是为了避免与抄袭指控！） HPLC系统的所有组件都在这里显示，只是你必须控制。 在溶剂，可通过该系统的泵，它必须用氦气“sparged”去除水中溶解的空气。 泵内或列的溶剂出口压力突然变化可能会导致泡沫的出现。 这些气泡泵内可以实际损害的机制，并至少会导致泵停止移动的液体。 分光探测器的细胞内，气泡会导致通过它的光强度的波动，给人非常嘈杂的输出信号。 使用非常低的氦流量喷雾为5分钟左右的样品，然后关闭启动泵之前，氦关闭。 （如果溶剂中含有有毒的化学品，引擎盖下喷射。）溶剂瓶中小矩形是特殊的不锈钢“airstones”作为为溶剂，要么过滤器或氦气鼓泡。 素泵，我们重视一个50 ml注射器（柱塞的方式）总理/冲洗阀的出口。 打开阀门几圈，然后打开泵和按RUN按钮。 如果您没有看到总理/清除漏的液体，按素瞬间泵上获得更快的抽水率。 返回建立流体流动时运行。 您可能需要拉注射器，以帮助通过泵在第一溶剂。 当你看到没有更多的气泡进入注射器，泵催芽。 关闭的主要阀门。 泵现在应该迫使溶剂通过系统的其余部分。 观察它退出探测器。 确保浪费烧杯中收到。 卸下总理的注射器和空到废液容器。 设置泵每分钟1.0毫升。 如果一切顺利，泵的压力稳定在2000 PSI。 如果有人注射到列未过滤CRUD的压力将上升到最高的临界值，然后在你的蜂鸣声，如果报警都被设置。 关闭泵。 如果你是幸运的，所有需要接下来发生的是为你做的水管位和更换过滤器或预柱。 如果你很不幸，你就可以开始300美元购买一个新的列。 打开可变波长检测器，将其设置为250纳米。 因为探测器的输出被发送到电子积分，而不是其内置图表记录，剩余的探测器控制大部分将输出没有影响。 打开积分。 几家公司进行集成，内部是相同的，只有外面的熊光谱物理或瓦里安标志。 下列指示对任何这些相同的工作。 当你第一次打开它，它会询问日期和时间你。 无论是输入信息，或者只是打ENTER离开这些空白。 BR 设置峰值阈值（PT）1000输入偏移的偏移PT SHIFT = 1 0 0 0 ENTER。 （请注意，你能告诉多少次你推编辑光转变 - 只是尝试。） 衰减（AT）的设置与安泰信5到512 1 2输入。 设置图表的速度（CS）每分钟0.5英寸（厘米每秒）与中华电信SPD。 5输入。