半抗原免分析(全面).pptVIP

共同抗原与交叉反应 ELISA简介 （三） 免疫分析方法建立——苏丹红为例 Step 1: Hapten and conjugate Step 2: characterization of conjugate Step 3: chessboard tiatrion and calibration curve Step 4: optimization—nonessential Step 6: validation 一个难点：基质效应 1、固定相 聚次亚乙烯 * * 2、最常用的标记酶 1．辣根过氧化物酶(HRP):约有50％的EIA使用此酶。 2．碱性磷酸酯酶(AP):AP标记的结合物性质稳定，其活性可用分光光度计或荧光计测量。 3．6-磷酸葡萄糖脱氢酶(G-6-PD): 通常用于均相EIA。 4．β-半乳糖苷酶(β-Gal): 适用于均相EIA和非均相EIA。 5．苹果酸脱氢酶(MDH): 多用于尿样的均相EIA。 3、最常用的底物 邻苯二酚(OPC) 四甲基联苯胺(TMB) 4、缓冲液 PBS(T) Tris-HCl Na3N是HRP（辣根过氧化物酶）的抑制剂 酶标仪 4、仪器 酶标仪 例1、标记抗原浓度对检测的影响 * 例，pH影响 Step 5: sample analysis 基质效应 基质：样品中除了目标分析物外还含有其他的物质，这些物质可能会对检测结果造成干扰，这