布鲁氏菌实验室诊断研究进展.docVIP

布鲁氏菌病实验室诊断研究进展 高明华 樊庆德 徐春光 杨晓刚 （呼伦贝尔学院生命科学与化学学院 内蒙古 呼伦贝尔 021008） 布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)引起的一种重要人兽共患病。根据致病性和宿主特异性，将布鲁氏菌分为 6个种19个生物型，即羊种布鲁氏菌(B.meltensis)、牛种布鲁氏菌(B. abortus)、猪种布鲁氏菌(B. suis)、绵羊附睾种布鲁氏菌(B.ovis)、犬种布鲁氏菌(B. canis) 和沙林鼠种布鲁氏菌(B. neotomae)。另外，从海洋动物中分离到在致病性和分子特征上有别于前6种的布鲁氏菌，定为海洋种布鲁氏菌(B. maris)。据CDC报告，我国人布鲁氏菌病发生严重，2005~2007年全国布鲁氏菌病新发病人分别为18 416、19 013、21 901例，2008年1~10月新发病数已达27 264例，形势十分严峻。流行病学调查表明，感染来源主要是患布鲁氏菌病的羊，其次是牛及其他动物。并且具有疫区范围扩大、爆发点增多、典型病例增多、人群分布以农民和牧民为主等特点。(为有效预防和控制人和动物布鲁氏菌病，加强对动物布鲁氏菌病的检疫监测力度十分重要。为此本文就布鲁氏菌病实验室诊断方法研究进展作以综述。 1 免疫学诊断技术 1.1 血清凝集性试验 布鲁氏菌病传统检测方法有血清凝集试验、全乳环状试验(MRT)和抗人免疫球蛋白试验(Coomb’s)等。经典血清凝集试验包括标准试管凝集试验(SAT)和平板凝集试验(PAT)等在发达国家已基本上停止使用，取代方法是缓冲布鲁氏菌抗原试验，如虎红平板凝集试验(RBT)等。在国际贸易中，缓冲布鲁氏菌抗原试验是牛、羊、猪种布鲁氏菌病的指定试验。乳牛MRT依然是乳牛布鲁氏菌病监测的主要方法。由于凝集性试验是基于检测针对布鲁氏菌多糖O-链的抗体，因此会与有类似多糖O-链的细菌如耶尔森氏菌O:9等出现交叉反应。 1.2 补体结合试验（CFT） CFT至今仍是布鲁氏菌病诊断的重要方法，是牛、羊及绵羊附睾种布鲁氏菌病国际贸易指定试验，并作为确诊用。Adone等[2]以无抗补体活性的羊种布鲁氏菌B115 R型菌株为抗原建立检测抗体的CFT(B115-CFT)，并通过对RB51免疫的牛和水牛、绵羊附睾种布鲁氏菌感染的羊和犬种布鲁氏菌感染的犬血清中R型抗体进行检测表明，B115-CFT与RB51-CFT和HSE(布鲁氏菌热盐抽提物)-CFT相比，具有很高的敏感性和特异性。由于猪的补体会干扰豚鼠补体的作用，导致实验的敏感性降低38%~40%，因而CFT不适合猪种布鲁氏菌病的检测。 1.3 酶联免疫吸附试验（ELISA） ELISA是一种与CFT效果相当的方法，操作更方便，既可以作为确定检测，又可以作为筛选和鉴别用。但只有用于牛布鲁氏菌病的ELISA是国际贸易指定的，这种ELISA方法不仅用于血清学诊断，还可用于乳汁检查。(用于其他种布鲁氏菌病检测的ELISA方法也是研究的热点。Feldsherova等(应用鼠抗流产布鲁氏菌脂多糖(LPS)的单克隆抗体建立了用于牛种布鲁氏菌、羊种布鲁氏菌和猪种布鲁氏菌鉴定的ELISA，该法具有高度的特异性和敏感性，同时不与小肠结肠炎耶尔森氏菌O:3、O:9及鼠伤寒沙门氏菌和土拉热弗朗西斯氏菌反应。检测抗原的最低浓度可达0.05-0.1 ng/mL。Nielsen等(应用抗牛种布鲁氏菌S1119.3株S-LPS的O糖链(OPS)共同抗原表位且不与蛋白A/G结合的特异性单克隆抗体建立了第二代竞争ELISA (CELISA)，该方法通过单克隆抗体与牛被检血清中的抗体与S-LPS的竞争结合，用酶标蛋白A/G显色来进行检测。方法特异、敏感，并能区分牛种布鲁氏菌S19疫苗株免疫。Cakan等(应用商品化布鲁氏菌病IgG ELISA和IgM ELISA试剂盒对人布鲁氏菌病进行检测表明，当IgG ELISA和IgM ELISA同时应用时，对于疾病的诊断具有很高的敏感性。ELISA的效果关键在于抗原的选用。标准化牛种布鲁氏菌病ELISA检测方法使用了S-LPS抗原。 1.4 免疫组化法（Immunochemistry） Ilhan等[7]应用免疫组化法检测了羊种布鲁氏菌抗原在流产胎儿组织中的存在与分布情况。在110份流产胎儿样本中检出抗原的有33份(占30%)。33份阳性样本中检测到抗原的，肺25份(占22.7%), 肝21份(占19%), 脾13份(占11.8%), 肾6份(占5.4%)。抗原主要位于肺巨噬细胞和中性粒细胞及肝枯否氏细胞的细胞膜上。结果证明，免疫组化法可用于羊种布鲁氏菌引起的绵羊流产福尔马林固定样本的检测。 1.5 胶体金免疫层析