液质联用发展史+液质联用仪原理+应用..doc

液相色谱-质谱联用 一、液质发展史 1.质谱发展简史 质谱作为检测器，具有灵敏度高、专属性好的特点，与其他色谱技术相连接，已广泛的应用于各个研究领域。欲学习液质，我们先了解一下质谱发展的过程—— 19世纪末，E.Goldstein在低压放电实验中观察到正电荷粒子，随后W.Wein发现正电荷粒子束在磁场中发生偏转，这些观察结果为质谱的诞生提供了准备；1912年，英国物理学家Joseph John Thomson研制出世界上第一台质谱仪（1906年诺贝尔物理学奖获得者、英国剑桥大学教授）；1917年，电喷雾物理现象被发现（并非为了质谱）；1918年，Dempster 180°磁扇面方向聚焦质谱仪；1935年，马陶赫(Marttauch)和赫佐格(R. Herzog)根据他们的双聚焦理论，研制出双聚焦质谱仪；1940年，尼尔(Nier)设计出单聚焦磁质谱仪，又于1960年设计并制成了一台小型的双聚焦质谱仪；1942年，第一台商品质谱仪；1953年，由鲍尔(Paul)和斯坦威德尔(Steinwedel)提出四极滤质器；同年，由威雷(Wiley)和麦克劳伦斯(Mclarens)设计出飞行时间质谱仪原型；1954年，英格拉姆(Inghram)和海登(Hayden)报道的Tandem系统，即串联的质谱系统(MS/MS)；1955年，Wiley Mclarens 飞行时间质谱仪；1960s，开发GC/MS；1974年，回旋共振质谱仪； 1979年，传送带式LC/MS接口成为商业产品； 1982年，离子束LC/MS接口出现； 1984年，第一台电喷雾质谱仪宣告诞生； 1988年，电喷雾质谱仪首次应用于蛋白质分析；1989年，Hens G. Dohmelt和 W. Paul,因离子阱（Ion trap)的应用获诺贝尔物理奖；2002年，J. B. Penn 和田中耕一因电喷雾电离（electron spray ionization, ESI）质谱和基质辅助激光解吸电离(matrix-assisted laser desorption ionization, MALDI)质谱获诺贝尔化学奖。 2.“接口”技术发展简史 3.液质联用仪发展简史 从“接口”技术发展史来看，液质“接口”技术的难度要大于气质的，这是因为液相色谱中的流动相是液体，而质谱检测的是气体离子，所以“接口”技术必须要解决液体离子化难题。伴随这一难题的解决，液质联用的发展也日新月异，并广泛的应用于各领域。 1977年，LC/MS开始投放市场；1978年，LC/MS首次用于生物样品分析；1989年，LC/MS/MS研究成功；1991年，API LC/MS用于药物开发；1997年，LC/MS/MS用于药物动力学高通量筛选；2002年美国质谱协会统计的药物色谱分析各种不同方法所占的比例。1990年，HPLC高达85%，而2000年下降到15%，相反，LC/MS所占的份额从3%提高到大约80%。我们国家目前在这方面可能相当于美国1990年的水平。 二、液质仪器基本构造及原理 质谱分析过程：样品通过进样系统进入离子源，将样品离子化变为气态离子混合物，由于结构性质不同而电离为各种不同质荷比（m/z）的分子离子和碎片离子，而后，带有样品信息的离子碎片被加速进入质量分析器，不同的离子在质量分析器中被分离并按质荷比大小依次抵达检测器，经纪录即得到按不同质荷比排列的离子质量谱，也就是质谱(mass spectrum)。 质谱的基本结构 质谱仪一般由进样系统、电离源、质量分析器、真空系统和检测系统构成。 （一）进样系统 在液质联用中一般有两种进样方式。第一种是输注，即用注射器泵（syringe pump）将样品溶液直接缓慢输入到离子源。这种方法虽然简便、快速，但是需要相对多的样品，且难以实现自动进样分析。第二种是流动注射，即将样品溶液注入HPLC进样系统，由LC泵缓慢推动溶剂将样品溶液直接注入离子源。这种方法既简便、快速，样品溶液的用量较小，易于实现自动进样分析。 （二）电离源液质联用中最常用的电离源有大气压电喷雾电离源（ESI）和大气压化学电离源（APCI），两者同属于大气压电离（API）技术，其离子化过程发生在大气压下。1、电喷雾(ESI) 工作原理：电喷雾电离(ESI)是在液滴变成蒸汽，产生离子发射的过程中形成的，溶剂由液相泵输送到ESI Probe，经其内的不锈钢毛细管流出，这时给毛细管加2－4kv的高压，由于高压和雾化气的作用，流动相从毛细管顶端流出时，会形成扇状喷雾，使液滴生成含样品和溶剂离子的气溶胶。 电喷雾离子化可分为三个过程：1）形成带电小液滴：由于毛细管被加高压，造成氧化还原反应，形成带电液滴。 2）溶