灵芝免疫节蛋白对肺腺癌的防治功效.doc

柯俊良教授简历 【学历】 台大医学院生化所 博士 辅仁大学生物学研究所 硕士 辅仁大学生物学系 学士 【经历】 中山医学大学医学分子毒理学研究所副教授 农药药物毒物实验所药剂系 博士后研究员 台大公卫学院 HLA 研究室 博士研究员 中山医学院毒理学研究所 助理教授 【现任】 中山医学大学医学分子毒理学研究所 教授兼所长 【专长】 环境毒理﹑癌症分子生物﹑生物农药 近年来中草药在抗癌方面的能力陆续被证实，其中灵芝一直被视为传统中药的翘楚，其有效成分包括灵芝多糖体，灵芝三萜类和灵芝免疫调节蛋白等等。许多细胞核动物实验已经证实。灵芝多醣体和灵芝三萜类具有抗肿瘤等功能，而不同灵芝属菌类，如小孢子灵芝（Ganoderma microsporum）﹑赤芝（Ganoderma fucidium））γ表现量的功能，且其胺基酸序列与免疫球蛋白重链区高达30﹪相识度，不具有半胱胺酸（cysteine） 目前科学界对端粒酶的调控已非常清楚，特别是『端粒酶反转录酶（telomerase reversetranscriptase subunit,简称HTDRT） 』的基因表现量（mRNA），其在肿瘤组织表现很高，但在正常组织表现却特别低；如果将HTERT基因转殖到不会表现端粒酶活性的细胞株，则可使该细胞株表现出端粒酶活性，由此可以进一步推测，hTDRT的转录活化可能是调控端粒酶的主要步骤。 一般常以『染色体端粒酶重复增幅步骤（telomeric repeat amplification protocol.TRAP assay）』来侦测端粒酶的活性，结果发现。随着灵芝免疫调节蛋白浓度增加，A549肺癌细胞株端粒酶的活性明显降低。再以半定量（RT-PCR）和定量（real-lime PCR）分析，结果发现，hTERT的mRNA也会随着灵芝免疫调节蛋白浓度增加而减少。进一步以启动子荧光报告基因活性分析，结果发现，随着灵芝免疫调节蛋白浓度增加，hTERT启动子活性亦随之减少。 我们的结论显示，灵芝免疫调节蛋白处理细胞后，在基因层次上，灵芝免疫调节蛋白藉由抑制转录因子（c-Myc）与hTERT的启动子的结合（图1）降低hTERT的转录活性，最后导致端粒酶的活性丧失：在转译后修饰方面，灵芝免疫调节蛋白进到细胞的内质网，并且诱发内质网压力造成钙离子的释出钙离子的释出会抑制AKT激酶的活性，使NF-nB无法与hTERT蛋白结合进入细胞核，进而抑制端粒酶的活性。 同时使用蛋白输出抑制剂（Leptomycin B）和蛋白分解酶抑制剂（MG132）,皆会阻止hTERT蛋白被带出细胞核外，并且恢复端粒酶的活性，而根据我们的研究发现，灵芝免疫调节蛋白促使hTERT蛋白坐落位置的转移，也与核输出机制有关（图1）。此外，灵芝免疫调节蛋白液会造成肺癌细胞的细胞周期停滞在G1期，并趋于未成熟的细胞衰老。 综合上述研究发现，在肺癌细胞中，灵芝免疫调节蛋白在抑制端粒酶活性的过程里，影响hTERT蛋白的坐落位置（转译后修饰的调控）。比抑制hTERT基因的表现（转录的调控）更显重要。而经由动物实验我们也证实，灵芝免疫调节蛋白确实具有抑制肿瘤生长的能力。 本实验研究结果证实，自松杉灵芝菌丝体纯化的免疫调节蛋白具有抗癌功效，此免疫调节蛋白可应用于抑制肺癌细胞的端粒酶活性，将来有机会发展出治疗或搭配其他抗癌药物一起处理，抵抗肿瘤，并减少肿瘤细胞的复发。 灵芝免疫调节蛋白对端粒酶活性的抑制作用 会促使肺癌细胞『衰老』，停滞生长 我们的研究也证实，灵芝免疫调节蛋白会抑制A549.Calu-和H1355等肺癌细胞生长，但对人类正常细胞株则毫无影响。 研究进一步发现，灵芝免疫调节蛋白可使肺癌细胞周期停滞在G1 期，走向未成熟的衰老反应（Prematuresenescence）,并明显增加ysosome胞器增大，此为衰老细胞重要特征。 一般哺乳类细胞大多会藉由两种细胞防御机制，细胞凋亡（apoptosls）和细胞衰老（cellularsenescence）,避免正常细胞走向癌化阶段，这两种细胞防御机制具差异，细胞凋亡会造成细胞死亡；细胞衰老还可分为『复制衰老（replicativesenoscence）』和『未成熟衰老（prematuresenescence）』.复制衰老主要是正常细胞因为染色体端粒酶复制问题所产生的生长屏障（Hayfllcklimlt）进而诱发的细胞反应；未成熟的衰老则是细胞受到外在压力（如氧化性伤害），造成年轻的细胞走向细胞老化的现象。 这两种细胞衰老反应的差别主要在于，前者细胞的端粒序列长度会逐渐缩短，后者细胞的端粒序列长度则不受影响，但端粒序列的稳定受到破坏。两者细胞型态和生理特征皆相同吗，包括细胞外形呈现平坦及胀大，细