第二章分子荧光光谱法(去磷光)预案.pptVIP

上图：用鼠抗golgin 97和兔抗COX IV分别作为一抗，用CF 488染料标记的山羊抗鼠IgG二抗和CF555标记的山羊抗兔的二抗染色的HeLa细胞。用CF647-鬼笔环肽标记微丝，并用Hoechest33342标记DNA。（其中绿色=高尔基体、红色=线粒体，蓝色=细胞核，紫红色=细胞骨架） 基于菁类荧光染料一种双模式粘度探针，在非粘性或者低粘度的溶液中，由于中位醛基的自由转动，消耗了激发能，染料的荧光淬灭；随着溶液的粘度增加或者温度的降低，荧光发射增强，并且长波长的荧光对粘度的敏感性高，表现比例增加，荧光比例值最高达到12倍，同时染料在长波长处的荧光寿命从不到200 ps增加到1450 ps。能更好地对细胞内复杂环境的粘度进行成像检测，这是以前的检测中是无法做到的。 * 对于稀溶液，当? bc0.02时： IF----荧光强度 ?F-----荧光量子产率 b--吸收光程 ?--摩尔吸光系数 C--荧光物质浓度 当I0一定时， 2.5 分子荧光光谱法的应用 * 低浓度时，荧光强度与物质的浓度呈线性关系， 高浓度时，由于自熄灭和自吸收等原因，荧光强度与物质的浓度不呈线性关系 2.5 分子荧光光谱法的应用 与紫外－可见分光光度法相比，其灵敏度可高出2－4个数量级，其检测下限通常可达0.1～0.001 ?gcm-3。 原因？ * 2.