第四章 因突变.pptVIP

* 突变生成过程 * （一）诱变剂接触DNA分子之前 细胞的透性影响诱变剂的诱变效应 当化学诱变剂处理微生物细胞时，首先和细胞充分接触，通过扩散作用诱变物质穿过细胞壁、膜及细胞质，才能达到核质体，与DNA接触。 前诱变剂在细胞质的作用下会转化成诱变剂 诱变剂透过细胞壁后还要穿过细胞质，这个过程诱变剂也会发生一些化学变化，受到各种因素的影响，如亚硝酸和蛋白质或游离氨基酸起反应，使它们氧化脱去氨基，以此影响诱变效应。 一、突变体的形成过程 * （二）突变发生过程 诱变剂和DNA接触后能否发生基因突变，与DNA是否处在复制状态有密切关系。而DNA复制活跃程度与某些营养条件和细胞生理状态有关。 如，一个氨基酸营养缺陷型的大肠杆菌菌株，如果在培养基中除去它需要补给的氨基酸，培养1—2h，用亚硝基胍进行诱发回复突变，其诱变效应显著下降。反之，如补给所缺的氨基酸，则频率提高。诱发效应上升的先后次序是精氨酸、丝氨酸、脯氨酸。这些顺序与各个基因在DNA上的排列次序是相吻合的。这被解释为DNA在染色体上的复制由某一位点开始逐步向前，亚硝基胍最有效的诱变作用正好发生在复制的那个位置。 又如，大肠杆菌的β-半乳糖苷酶结构基因Z的诱发效应，与培养基中加诱导物和不加诱导物有关。加诱导物以后，用亚硝基胍、硫酸二乙酯和甲基硫酸乙酯等诱变剂处理，它们的诱变效应比不加诱导物的高6—8倍。认为这一现象可能由于DNA转录时双链解开，使以上诱变剂的诱变效果处于最为有利的状态。 但如果用X射线、5-溴尿嘧啶、2-氨基嘌呤等诱变剂来进行处理时，则是否加诱导物对诱变效果没有什么影响，这表明不同性质的诱变剂和DNA双链的构形对突变都会有影响。 从诱变剂进入细胞，到突变发生，会受到多种酶的作用和影响。很多实验证明，在酶的作用下，有的诱变剂诱变作用加强了，有的却减弱了，有的甚至完全变成另一种物质。显而易见，在诱变剂进入细胞后，那些对酶的活性和作用有影响的物质及培养条件都将间接地影响诱变剂的诱变效应。 * （三）突变体的形成 诱变剂和DNA接触后发生化学反应，继而使DNA上的碱基发生变化，产生突变。但是从突变到突变体的形成要经过相当复杂的过程，并且不是所有的突变都能形成突变体。当一个突变发生后，要经过复制，才能成为突变体。在复制前后过程中，生物细胞有一整套修复系统进行修补，还有某些校正机能的作用以及细胞中一系列酶的反应，都有可能使突变了的DNA结构复原，以保证遗传物质的相对稳定和生物自身准确地繁殖后代。 * 二、突变的修复 DNA分子要求保持高度的精确性和完整性 保障DNA安全的修复系统 纠正偶然的复制错误：如：DNA多聚酶3’→5’的校读功能、糖基酶修复系统等 DNA分子损伤的系统 ：如光复活修复系统、切除修复系统、重组修复系统、SOS修复系统 * （一）复制错误修复 1．DNA多聚酶的校读功能 DNA聚合酶的3’→5’ 核酸外切酶活性 * 2．N-糖基酶修复系统 N-糖基酶（N-glycosylases） 作用：专一识别 DNA分子中的非标准碱基和碱基的衍生物。 例：尿嘧啶-N-糖基酶系统修复机制 参与的酶 ——尿嘧啶N-糖基酶、AP限制性内切酶、核酸外切酶、DNA聚合酶Pol I、DNA连接酶。 * 尿嘧啶-N-糖基酶系统的修复过程 3.错配修复（mismatch repair） 识别错配的碱基对； 对错配的一对碱基要能准确区别哪一个是错的，哪一个是对的； 切除错误的碱基，并进行修复合成。 * （二）损伤修复 （T=T） 1．光复活（photoreactivation）（又称光修复） 光复活作用：指细菌在紫外线照射后立即用可见光照射，可以显著地增加细菌的存活率，降低突变率。 光修复机制只作用于紫外线照射所形成的损伤 修复机制：光复活酶（photo-reactivating enzyme，PR酶），催化嘧啶二聚体分解成为单体 * 光复活作用 * 2．切除修复(excision repair) ——暗修复（ Uvr修复系统 ） 是细胞的主要修复系统，发生在DNA复制之前，是对模板的修复。 一种多步骤的酶反应过程：限制性内切酶、核酸外切酶、DNA聚合酶以及连接酶的协同作用 结果：使损伤的DNA分子恢复正常 修复过程： 切 补 切 封 * UvrABC限制性内切酶切除修复系统 * 限制性内切酶 E. coli的修复内切酶由三种亚基构成：UvrA、UvrB、UvrC； 限制性内切酶UvrABC能修复不同类型的损伤； 它识别的是DNA某一部位缺少正