2013级复习：基因工程课时2探究.pptVIP

选修3现代生物科技专题专题1基因工程 第2课时：基因工程的基本操作程序 考纲 基因工程的原理及技术(Ⅱ) 复习目标 掌握基因工程的基本操作程序，并能分析实例 1、基因工程的基本操作程序的四个步骤？ 2、什么是目的基因，获取目的基因的方法有哪些？ 3、什么是基因文库？基因文库的两种类型及二者的区别。 4、说出PCR的中文全称、原理、反应条件及PCR扩增的过程5、说出PCR和DNA复制的区别。 6、说出基因表达载体的组成及各组成部分的作用。 7、将目的基因导入不同的受体细胞（植物、动物、微生物细胞）的方法分别是什么？ 8、说出目的基因在分子水平的检测和个体水平的鉴定。 考点复习提纲 1、目的基因的获取 目的基因主要是指______________________ 编码蛋白质的结构基因 获取目的基因的常用方法： （1）从基因文库中获取 （2）利用PCR技术扩增 （3）人工合成 考点突破 1 注意：要保持基因的完整性 1）、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库. 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 基因文库 ① 概念：PCR全称为_______________，是一项 在生物____复制___________的核酸合成技术 ③条件：___________、_______________、___________ 、 ___________ （Taq酶）. ②原理：__________ 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 模板DNA 四种脱氧核苷酸 DNA引物 热稳定DNA聚合酶 2）、利用PCR扩增目的基因 ④方式：以_____形式扩增，即____（n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 使目的基因的片段在短时间内大量扩增 指数 2n PCR过程 a、变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、复性（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 3)PCR技术扩增与DNA复制的比较 PCR技术 DNA复制 相同点 原理 条件 不同点 解旋方式 场所 酶 结果 碱基互补配对 需要模板、原料 酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 基因表达载体的组成： 它们有什么作用？ a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是mRNA结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 考点突破 2 受体生物 植物 动物 微生物 受体细胞 导入方法 受精卵或 体细胞 受精卵 细胞/个体 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 显微注 射技术 用Ca2+处理成感受态细胞 考点突破3、将目的基因导入受体细胞 1）、转化： 2）、完成表格 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 农杆菌转化法 特点: 特定的受体：能感染双子叶植物和祼子植物。 特定的载体：Ti质粒，Ti质粒中的T—DNA可转移至受体细胞并整合到其染色体上 转化过程: Ti质粒 目的基因 构建 表达载体 导入 植物细胞 插入 植物细胞染色体DNA 表达 新性状 转入 农杆菌 分子 检测— ①导入检测 ：检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②转录检测：检测是否转录出了mRNA ③翻译检测：检测是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— DNA分子杂交 考点突破 4 、目的基因的检测与鉴定 个体生物学水平的鉴定 抗原－抗体杂交 方法—— 方法—— 分子杂交 例1．(2010·天津理综，7Ⅰ)下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因，ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamHⅠ、HindⅢ、SmaⅠ直线所示为三种限制酶的酶切位点。 据图回答： (1)图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用_____________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含______________的培养基上进行。 HindⅢ和BamHⅠ 氨苄青霉素 据图回答： (2)能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序列是_____(填字母)。 A．启动子 B