PacBioRSII的高通量测序应用..docxVIP

PacBio RS II 的高通量测序应用Pacific Biosciences 公司的PacBio RS II单分子实时测序（single molecule, real-time，SMRT）测序反应是在其专利SMRT cell中进行的，每个SMRT cell中有150,000个ZMW（纳米级的零模波导孔zero-mode waveguides）,每个ZMW都能够包含一个DNA聚合酶及一条DNA样品链，SMRT Cell能够平行检测大约75,000个单分子测序反应。当测序进行时，专利的包被技术保证DNA 聚合酶和模板形成的复合体被锚定在 ZMW 的底部，反应溶液中带有标记着不同荧光磷酸基团的高浓度核苷酸可有效保证聚合酶合成的速度、精确性和持续合成的能力；检测装置则透过ZMW 底部的基层来实时观察 DNA 的合成过程：当 DNA 聚合酶检测到正确的核苷酸并将其插入模板时，这些碱基会在插入位置保留几十毫秒，而游离状态的碱基扩散的速度大约是几十微秒，在这个时间差中，检测器就可以检测到插入碱基的荧光信号，并将其转换成相对应的碱基类型。然后，DNA 聚合酶将碱基所带的标记着荧光集团的磷酸基团剪掉以形成天然DNA 链，荧光信号迅速衰减至基线并开始下一轮的合成。PacBio RS II使用一套优化的算法，将光学系统所捕获的信息翻译成对应的ACGT碱基信息。一旦测序开始，实时的数据就被传送到初步分