2.1复制说课.pptVIP

聚合反应机理： 半保留复制 DNA复制时每个子代DNA分子的一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式称半保留复制。 DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅲ 亚基数目 1（单体酶） ＞1（多亚基酶 ） ＞1（多亚基酶） 5’ 3’聚合活性 + 中 + 很低 + 很高 3‘ 5’外切活性 + + + （保护DNA复制的 忠实性fidelity） 5‘ 3’外切活性 + - - 核酸外切酶活性 小结－维持DNA复制准确性的因素： 内因: ① 按碱基配对原则 (错配率10-4~10-5) ② DNA聚合酶的作用 (错配率10-4~10-5)  ? 对碱基的识别作用----选择正确的碱基参 入到引物末端 ? 对底物的识别作用----先识别引物最后 一个碱基是否正确, 后识别参入的dNTP是否正确 ? 校正阅读---- 3′→ 5′外切酶的作用 ③ RNA引物最终被切除, 提高了复制准确性 ④复制完成后对错配碱基进行修复的酶系统 外因： ? 四种dNTP要平衡； ? Mn2+和Mg2+的比例、浓度（酶活） 冈崎片段 在DNA复制过程中，领头链能连续合成，而随后链只能是断续的合成5??3 ?的多个短片段，这些不连续的小片段以其发现者的名字命名为冈崎片段。 冈崎片段：真核生物中100-200个核苷酸（核小体的DNA单位）。原核生物中1000-2000个核苷酸（相当于一个顺反子）。 引物合成酶（引发酶）：此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物（Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。 DNA连接酶（1967年发现）：若双链DNA中一条链有切口，一端是3’-OH，另一端是5‘-磷酸基，连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键，而使切口连接。但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来。 T4噬菌体的DNA连接酶不仅能在模板链上连接DNA和DNA链之间的切口，而且能连接无单链粘性末端的平头双链DNA。 双链的解开 RNA引物的合成 DNA链的延伸 切除RNA引物，填补缺口，连接相邻的DNA片段 ① 互相缠绕的双链母本DNA，复制从特定的位置(复制原点Ori or O)开始，该位置常是富含A、T区段。 ②首先DNA解螺旋酶(DnaB)打开局部双链，SSB与每条单链结合,稳定单链并防止DNA复性;然后在DNA旋转酶（TOPⅡ)的作用下，使螺旋DNA局部变成松弛态。 （3）DNA链的延伸 在DNA聚合酶Ⅲ的催化下，以四种脱氧核糖核苷5’-三磷酸为底物，在RNA引物的3’端以磷酸二酯键连接上脱氧核糖核苷酸并释放出焦磷酸。DNA链的延伸同时进行领头链和随后链的合成。两条链方向相反。 滞后链的延长: ? 当新形成的冈崎片段延长至一定长度, 其3′-OH遇到上一个冈崎片段时即停止合成。 ? 一旦冈崎片段合成完成，其RNA引物即被除去，通过DNA聚合酶Ⅰ催化合成DNA取而代之，并形成一个切口，此切口由DNA连接酶连接封闭。 （4）复制的终止 包括： 切除引物：由DNA聚合酶I催化 填补空隙：由DNA聚合酶I催化 连接缺口：由DNA连接酶催化 端粒主要有两大生理功能： （1）维持染色体结构的完整性，防止染色体被核酸酶降解及染色体间相互融和。 （2）防止染色体结构基因在复制时丢失，解决了末端复制的难题。 DNA复制时，DNA聚合酶必须在RNA引物基础上从5′向3′方向延伸，而5′端RNA引物去除后因无引物的存在而不能复制，结果每复制一次染色体末端将丢失一段序列。端粒的存在使每次丢失的仅为端粒的一部分，从而保护了染色体内部的结构基因。另外，有些研究还显示，端粒与核运动有关，可能对同源染色体的配对重组有重要意义。 端粒的合成主要依靠端粒酶来催化。 线性DNA在复制完成后，其末端由于引物RNA的水解而可能出现缩短。故需要在端粒酶（telomerase）的催化下，进行延长反应。 真核生物中DNA的复制特点 1、真核生物染色体有多个复制起点，多复制眼，呈双向复制，多复制子。 2、冈崎片段长约200bp. 3、真核生物DNA复制速度比原核慢。 4、真核生物染色体在全部复制完之前起点不再重新开始复制；而在快速生长的原核中，