流式细胞仪使用方案.docVIP

流式细胞仪使用方案 单细胞悬液的制备 贴壁细胞↓ 0.25%胰蛋白酶消化2至3min ↓ 移至玻璃离心管 ↓ 加入D-hank‘s液，轻轻吹打 ↓ 用800-1000r/min离心机离心3至5min ↓ 『去上清，加入PBS均匀吹打，短时低速离心。』重复三次 ↓ 加PBS充分吹打，保证细胞数每毫升1万个作用 ↓ 加95%乙醇（1：10），固定30min ↓ 4度冰箱过夜或-20度长时保存 染色技术 1选取荧光素 2样品染色步骤 PBS洗细胞1-2次 ↓ 加荧光单抗，暗处孵育15-30min ↓ 如果必需，加荧光二抗，暗处孵育15-30min ↓ PBS洗细胞一次 ↓ 过300目尼龙网 ↓ 上机检测 3对照的设置 阴性对照 同型对照（见附录） 流式细胞数据处理与分析 数据的显示通常可分为一维单参数直方图（histogramplot）、二维点图（dotplot）、二维等高图（contour）和假三维图（pseudo3D）等。下面简述最常用的单参数直方图和二维点图。 ? 1. ?单参数直方图单参数直方图是一维数据用得最多的图形，可用来进行定性分析和定量分析。横坐标表示荧光信号或散射光信号强度的相对值，其单位用“道数”（channel）表示，横坐标可以是线性的，也可以是对数的。纵坐标通常代表细胞出现的频率或相对细胞数。下面以研究细胞周期为例说明如何分析单参数直方图所表达的