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* 质粒在大肠杆菌有什么作用呢？既然是DNA就能有性状----质粒不能单独存活，必须在大肠杆菌的细胞质中才能复制（需要的酶，原料都来自大肠杆菌细胞质），存活。 * * G C T T A A G C T T A A EcoRⅠ 识别特定核苷酸序列 SmaⅠ G C G C G C G C G G C C 4 作用特点： 碱基是反向、对称、重复排列的。 序列特点： G C T T A A G C T T A A EcoRⅠ SmaⅠ G C G C G C G C G G C C 4 作用特点： 识别特定核苷酸序列 ,切断磷酸二酯键 粘性末端 平末端 粘性末端 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 思考? GAATTCCGTAGAATTCGGATT 尝试写出下列序列受EcoRI限制酶作用后的黏性末端 CTTCATGAATTCCCTAA GAAGTACTTAAGGGATT CTTAAGGCATCTTAAGCCTAA CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 模拟制作： 　　　用剪刀在特定部位对棉花DNA进行模拟切割，并将模拟毒蛋白基因取出，再用胶纸模拟基因种间连接。 棉花的一段DNA 含毒蛋白基因的细菌DNA片段 类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 功能 大肠杆菌 T4噬菌体 恢复 磷酸 二酯键 只能连接黏性末端 能连接黏性末端和平末端(效率较低) 相同点 差别 （二）“分子缝合针”——DNA连接酶 G C T T A A G C T T A A DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？ 将外源基因送入受体细胞。 (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” ①载体的作用： 质粒 噬菌体或者动植物病毒等 ②载体的种类： 质粒： 裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体（即拟核DNA）之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。 (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” 三、基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” 1、通常以质粒作为载体 质粒——细菌细胞中一种很小的环状DNA分子。 裸露的、结构简单、独立于细菌之外，并且有自我复制能力 氨苄青霉素抗性基因 质粒 拟核 大肠杆菌细胞 目的基因插入位点 复制原点 ⒈载体需要的条件： 　 ⑴有1至多个限制酶切点 　 (2)导入基因能在受体 细胞中复制、表达 　 (3)有某些标记基因，便于筛选 (4)对受体细胞无害。 (5)载体大小适当。 　 (三)基因进入受体细胞的载体 ——“分子运输车” 抗Amp 含有Amp的培养基 1)不属于质粒被选为基因运载体的理由是 A、能复制 （ ） B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA D 练习 2）有关基因工程的叙述中，正确的是（ ） A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 B、质粒是基因工程中唯一的载体 C、载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶 切点，以便与目的基因连接 D、DNA连接酶使黏性末端的碱基之间形成氢键 C 2 7 4 8 3 6 1 5 已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因，现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么？请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论。 对照组：不添加抗生素 实验组1：添加一定浓度的四环素 实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素 实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素 练习 对照组 实验组1 实验组2 实验组3 结 论 预期一 ＋ ＋ ＋ ＋ 预期二 ＋ ＋ － － 预期三 ＋ － ＋ － 预期四 ＋ － － － 对照组：不添加抗生素 实验组1：添加一定浓度的四环素 实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素 实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素 既含有抗四环素基因也含有抗氨苄青霉素基因 只含有抗四环素基因 只含有抗氨苄青霉素基因 既不含有抗四环