2017整理★★★免疫自讲--单克隆抗体的制备.pptVIP

单克隆抗体的制备 一、概述 动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系，具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞分裂增殖形成效应B细胞（浆细胞）和记忆B细胞，大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体（monoclonal antibody）。 单克隆抗体的制备 B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。 单克隆抗体的制备 1994年Winter等创建了以噬菌体抗体库技术为代表的基因工程抗体，是单克隆抗体技术的又一重要进步，该技术是按人工设计所重新组装的新型抗体分了，使不经免疫既可获得任何一种动物(包括人)的特异性抗体成为可能，目前基因工程抗体在疾病的预防、诊断、及治疗方面已获得广泛应用。 单克隆抗体的制备 1. 致敏淋巴细胞 2. 骨髓瘤细胞 3. 饲养层细胞 4. 细胞融合 5. 选择性培养 6. 特异性抗体的检测 7. 杂交瘤细胞的克隆化 8. 杂交瘤的冻存和复苏 9. 单克隆抗体的大量制取 10.单克隆抗体的纯化 单克隆抗体的制备 抗体的应用经历了非人源抗体、人鼠嵌合抗体、人源化抗体，最终到制备全人源单抗的转基因小鼠和噬菌体展示文库等不同的阶段。 单克隆抗体的制备 1、优点 具有特异性高、效价高、纯度高、理化性状均一、重复性强且来源稳定可大量生产等优点。 在体外“永久”地存活并传代 适用于以标记抗体为特点的免疫学分析方法 可用于体内的放射免疫显像和免疫导向治疗 单克隆抗体的制备 2、局限性 ： 固有的亲和性和局限的生物活性限制了它的应用范围 反应强度不如多克隆抗体 制备技术复杂、费时费工、价格较高 单克隆抗体的制备 用于疾病诊断方面 用于疾病的治疗 用作研究工具 五、应用 这项新技术从根本上解决了在抗体制备中长期存在的特异性和可重复性问题，可用于探讨 用于疾病诊断方面 用于疾病的治疗 用作研究工具 单克隆抗体的制备 可用以检测淋巴细胞表面分子, 以区分不同分化阶段的淋巴细胞, 用于鉴别淋巴细胞。 可用于鉴定病原体, 准确诊断感染性疾病。 可以用于肿瘤的诊断和分型。 单克隆抗体的制备 抗细胞表面分子单抗, 可抑制同种免疫反应,主要用于移植排斥反应的防治。 抗细胞因子单抗, 可抑制自身免疫反应, 主要用于自身免疫性疾病的治疗。 抗肿瘤单抗, 可用于肿瘤的导向治疗。 抗血小板治疗。 * * 单克隆抗体的制备 目录 概述 原理 分类 优缺点 应用 杰尼 Niels K. Jerne（丹麦） 巴塞尔免疫研究所 1911年--1994年 科勒 Georges J.F. K?hler（ 德国）巴塞尔免疫研究所1946年--1995年 米尔斯坦 César Milstein（英国）英国医学研究委员会分子生物实验室1927年-- 创立抗原选择抗体学说，发明单克隆抗体技术 单克隆抗体的制备 二、制备原理 三、分类： 非人源抗体 人-鼠嵌合抗体 人源化抗体 全人源抗体 四、优缺点： 五、应用 单克隆抗体的制备 *