沉淀蛋白质的常用方法(TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤).docVIP

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2017-02-02 发布于江苏
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沉淀蛋白质的常用方法(TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤).doc

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沉淀蛋白质的常用方法（TCA、乙醇、丙酮沉淀蛋白操作步骤） ?TCA-DOC? For?precipitation?of?very?low?protein?concentration ?1)?To?one?volume?of?protein?solution,?add?1/100?vol.?of?2%?DOC?(Na?deoxycholate,?detergent).? ?2)?Vortex?and?let?sit?for?30min?at?4oC.? 3)?Add?1/10?of?Trichloroacetic?acid?(TCA)?100%?vortex?and?let?sit?ON?at?4oC?(preparation?of?100%?TCA:?454ml?H2O/kg?TCA.?Maintain??in?dark?bottleat?4oC.Be?careful,?use?gloves!!!).?? 4)?Spin?15min?4oC?in?microfuge?at?maximum?speed?(15000g).?Carefully?discharge?supernatant?and?retain?the?pellet:?dry?tube?by?inversion?on?tissue?paper?(pellet?may?be? difficult?to?see).?[OPTION:?Wash?pellet?twice?with?one?volume?of?cold?acetone?(acetone?keep?at?–20oC).?Vortex?and?repellet?samples?5min?at?full?speed?between?washes]. ?5)?Dry?samples?under?vaccum?(speed?vac)?or?dry?air.?For?SDS,?resuspend?samples?in?a?minimal?volume?of?sample?buffer.?(The?presence?of?some?TCA?can?give?a?yellow?colour?as?a?consequence?of?the?acidification?of?the?sample?buffer??titrate?with?1N?NaOH?or?1M?TrisHCl?pH8.5?to?obtain?the?normal?blue?sample?buffer?colour.)? ? Normal?TCA? To?eliminate?TCA?soluble?interferences?and?protein?concentration ?1)?To?a?sample?of?protein?solution?add?Trichloroacetic?acid?(TCA)?100%?to?get?13%?final?concentration.?Mix?and?keep?5min?–20oC?and?then?15min?4oC;?or?longer?time?at?4oC?without?the?–20oCstep?for?lower?protein?concentration.?Suggestion: leave?ON?if?the?protein?concentration?is?very?low.?(preparation?of?100%?TCA:?454ml?H2O/kg?TCA.?Maintain??in?dark?bottleat?4oC.Be?careful,?use?gloves!!!).? ?2)?Spin?15min?4oC?in?microfuge?at?maximum?speed?(15000g).?Carefully?discharge?supernatant?and?retain?the?pellet:?dry?tube?by?inversion?on?tissue?paper?(pellet?may?be?difficult?to?see).? ?3)?For?SDS,?resuspend?samples?in?a?minimal?volume?of?sample?buffer.?(The?presence?of?some?TCA?can?give?a?yellow?colour?as?a?consequence?of?the?acidification?of?the?sample?buffer??titrate?with?1N?NaOH?or?1M?TrisHCl?pH8.5?to?obtain?the?normal?blue?sample?buffer?colour.)? ? ??Ace