蛋白质组学分析确认由Adaphostin诱导的氧化应激解析.docVIP

蛋白质组学分析确认由Adaphostin诱导的氧化应激 姓 名： 王芳 2011 年 2月 28 日 原文出处： Luke H. Stockwin；Proteomic Analysis Identifies Oxidative Stress Induction byAdaphostin [J]. Clin Cancer Res. 2007,13(12):3667-81 蛋白质组学分析确认由Adaphostin诱导的氧化应激 摘要： 目的：由于激活的BCR/ABL完全不同于被抑制的BCR/ABL，使得adaphostin被描述为可探寻作用机制的药物。在这项研究中，adaphostin治疗髓系白血病细胞株的蛋白质组学分析进一步阐明了其作用机制。 实验设计：用adaphostin分别处理 HL60细胞和K562细胞6,12和24小时，然后用二维电泳分析，取表达差异位点，用胰蛋白酶消化，再用液相色谱串联质谱分析。利用对苯二酚（1,4苯二酚）或过氧化氢处理的HL60细胞蛋白质组学分析氧化还原活性氢醌基团对adaphostin的作用。 结果： adaphostin处理的细胞经过分析发现49个差异表达的蛋白质，其中大部分是在与氧化应激或诱导细胞凋亡有关。有趣的是，当加入一种抗氧化剂N-acetylcysteine，这些蛋白质的调节作用几乎完全被阻止。蛋白质组数据证实GSTP1可以作为一种adaphostin抗性基因。随后对苯二酚或者双氧水处理过的HL60细胞分析发现细胞内的过氧化物增加，该结果和经adaphostin处理过的细胞具有相似的蛋白质组学图谱。 通过蛋白免疫印迹法鉴定发现超氧化物歧化酶与抗adaphostin有关，通过苯二酚抑制SOD可增强adaphostin敏感性分析表明SOD作为adaphostin第二抗性基因，然而转染SOD后却会降低毒性。重要的是，1,4苯二酚或过氧化氢处理后的adaphostin诱导BCR/ABL多肽降解，这表明激酶抑制是一种依赖活性氧的现象。 结论：Adaphostin应被归类为氧化还原活性物质，可替代对苯二酚。 Adaphostin是一个十分有效的抗癌药，但是他的作用机制尚不清楚。作为酪氨酸磷酸化抑制剂家庭一员，该化合物是一种结构不同的蛋白质酪氨酸酶抑制剂激酶。Adaphostin最初确定为AG957类似物，一个非竞争性ATP抑制剂p210Bcr/abl类似物。Adaphostin和 AG957 对恶性细胞增生的影响与p210bcr/abl多肽降解和快速诱导细胞凋亡有关。Adaphostin比AG957促进 BCR/ABL的体外降解的能力要高3-4倍，Adaphostin促进BCR / ABL的体外降解能力是AG957的3 - 4倍，它能稍微加强3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyltetrazolium bromide在细胞毒性试验中的活性， 这种机制与ATP依赖的抑制剂BCR/ABL相比，能防止未经磷酸化多肽降解，并且在经过较长时间曝光诱导细胞凋亡。更多的迹象表明两者的结构不同， adaphostin 和STI571可以协同对抗T-淋巴细胞白血病细胞株，而且adaphostin可以杀死抗STI571细胞，这为它们的结构不同提供了进一步的证据。在adaphostin显示出具有使白血病和神经胶质瘤细胞系不表达BCR/ABL后，adaphostin对BCR/ABL特异性受到质疑。这导致有人认为adaphostin是一个专一性不强的激酶抑制剂。 有报道认为，adaphostin诱导细胞死亡时伴随着活性氧的增加。由于adaphostin包含一个取代基，具有转移电子产生超氧化物自由基的的能力，从而提高活性氧的含量。为支持这一假说，对1,4-对苯二酚的研究就非常重要。另一种可能的解释来自于最新关于cDNA列阵的研究，研究表明cDNA能增加与铁代谢有关的基因转录表达，从而增加ROS的产生。随后有人解释adaphostin能促进铁螯合物释放游离的二价铁，这可能会催化形成有毒的羟基自由基通过反应[H2O2 + Fe2+→Fe3+ + OH-]。尽管通过实验获得了大量数据，但是几个问题仍然没有解决，反应中的基本分子还有待确定。例如，adaphostin已被证明能够抑制分泌血管内皮生长因子，从而有人提议，adaphostin就像其他此类化合物（如SU5416，semaxanib）具有抗血管生成活性。同样，信号转导通路的改变和adaphostin对某些恶性肿瘤具有选择性需要进一步关注。 在这项研究中，我们采用以二维电泳为基础的蛋白质组学平台来识别adaphostin的蛋白质调节和作用机制。