【2017年整理】反应型比例荧光探针检测多巴胺(二).docVIP

反应型比例荧光探针检测多巴胺（二） 　　关键词：探针 均三甲苯 硼酸三甲酯 1-溴芘 正丁基锂 多巴胺 荧光探针 表面活性剂 谷胱甘肽 标准物质 北京标准物质网 　　1. 结果与讨论 　　1.1 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u63A2%u9488 探针的合成 　　HMPB 的合成主要分为两步(图 1): 先利用 2-溴 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u5747%u4E09%u7532%u82EF 均三甲苯与 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u787C%u9178%u4E09%u7532%u916F 硼酸三甲酯反应生成米基硼酸二甲酯(MOME) ; 再利用 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=1-%u6EB4%u8298 1-溴芘在 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u4E59%u919A%u6EB6%u6DB2 乙醚溶液中与 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u6B63%u4E01%u57FA%u9502 正丁基锂反应生成有机锂化物, 加入 MOME 后即可制得 HMPB.HMPB 通过了核磁共振和质谱表征(图 S3)。 　　1.2 探针在缓冲溶液中对 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u591A%u5DF4%u80FA 多巴胺的荧光响应 　　由于探针 HMPB 是油溶性化合物, 在 PBS (pH 7.4)中溶解度很低, 因此, 选用癸基三甲基 HYPERLINK /HTML_Products/95/products_105495.html \o 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基(十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基) 溴化铵作为表面活性剂, 以增强 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u8367%u5149%u63A2%u9488 荧光探针在 PBS中的溶解度。 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u8868%u9762%u6D3B%u6027%u5242 表面活性剂的浓度会引起检测效果不同, 经过筛选得到当表面活性剂最终的浓度为0.14 mol/L时荧光探针检测 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u591A%u5DF4%u80FA 多巴胺具有最好的效果。未加入 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u591A%u5DF4%u80FA 多巴胺时, 浓度为 10 μmol/L HMPB的PBS溶液在484 nm处的荧光强度高于388 nm处; 而加入最终浓度为 2 μmol/L 的 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u591A%u5DF4%u80FA 多巴胺后, 388 nm 处荧光强度逐渐增强, 484 nm 处荧光强度逐渐减弱, 10min 内, 光谱变化基本达到饱和, 388 nm 处荧光强度不再增加(图 S1), 和484nm 处荧光强度的比值增加了 7倍左右(图1)。因此, 可以通过反应前后荧光的变化来检测 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u591A%u5DF4%u80FA 多巴胺。上述过程中HNPB的吸收光谱基本没有变化(图 S2)。 　　1.3 探针的可能检测机理 　　芘基非常容易形成激基缔合物, 在癸基三甲基 HYPERLINK /HTML_Products/95/products_105495.html \o 溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基(十六烷三甲基溴化铵琼脂培养基) 溴化铵胶束中, HMPB 的芘基有一部分以激基缔合物的形式存在。故癸基三甲基溴化铵增溶的HMPB PBS 溶液的荧光光谱呈现两组发光峰(图 2), 长波长的发光可归因于芘的激基缔合物发光, 短波长的发光可归因于芘的单体发光。 HMPB与 HYPERLINK /mainfiles/search.asp?addkey=yeskey=%u591A%u5DF4%u80FA 多巴胺的反应如 Eq. 1 所示。 HMPB 与多巴胺的反应产物 HMPB-DA 的溶解性水溶性优于HMPB, 芘基的