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Real-time PCR实时荧光定量PCR 刘丹 2011.07.23 中心法则 基本背景 DNA 存在于细胞核中并编码了基因 转录:双链DNA解链后利用其中一条链（编码链）合成信使RNA（mRNA） 翻译：mRNA从细胞核转移到细胞质中，mRNA 结合上核糖体开始翻译成蛋白质 蛋白执行基因的功能 Real-time PCR 步骤 1）RNA抽提—DEPC（RNA酶抑制剂） 2）RNA质量检测:? OD260/OD280=2.0 3）RT-PCR合成cDNA 4）Real-time PCR 一、Biomiga 总RNA提取系列产品 二、RNA 质量控制 One Drop! 三、RT-PCR RT-PCR是将RNA模板的反转录（RT）,和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。 RNA抽提---RNA反转录为cDNA --- cDNA进行PCR扩增 RT-PCR原理 利用逆转录酶能将RNA逆转录成DNA的特性，通过合适的引物，将细胞内的RNA（一般为mRNA)逆转录成cDNA， 然后，通过PCR技术，将痕量的cDNA扩增成大量的双链DNA。 RT-PCR分为一步法和两步法 单管一步法 反转录和PCR反应在一个管子中完成 ，得到的全部cDNA产物都一起经PCR扩增 ，灵敏度更高，但是容易相互干扰 。 两步法 反转录和PCR分开做，更为灵活