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高品质铁皮石斛工厂化育苗关键技术研究 　　摘 要：采用铁皮石斛“鲜食一号”为试材，经过母株的确定、外植体的选择、培养基的筛选以及培养条件的确定4个方面展开试验，得到外植体消毒措施、原球茎诱导培养基、丛生芽增殖培养基、幼苗生根培养方法，以及瓶苗出瓶培养及基质选择技术流程，试验结果直接应用于生产，为规模化、产业化发展提供技术支持，形成了铁皮石斛工厂化育苗技术体系。 　　关键词：铁皮石斛；工厂化育苗；诱导率；增殖率 　　中图分类号：R282.71 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20160732004 　　铁皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）是兰科石斛属的珍稀药用及观赏兰花[1]，其种子非常细小，没有胚乳，不含可供幼苗萌发和生长的营养成分，因此，在自然条件下种子的繁殖率很低。加之掠夺性采挖，其野生资源日益减少，远远不能满足国内外市场经济发展和医药的需要。由于铁皮石斛优异的药用价值和保健作用，近年来其种植和加工产业发展迅速，种苗需求量很大，优质铁皮石斛种苗供不应求。通过组织培养进行种苗快速繁殖技术在许多名贵花木上卓有成效，是珍稀花木种苗产业化的主要趋势，推动着种苗产业的升级换代。研究表明，铁皮石斛种子的年龄、茎段部位、放置方式、接种密度、继代周期、培养基的配方等均对组培快繁效果产生重要的影响[2]。此外，培养室的条件也会对组培苗的生长产生影响[3]。因此，有必要探索铁皮石斛最优的实用生产技术流程，建立优质铁皮石斛的种苗繁育体系，从而制定铁皮石斛健康种苗的工厂化生产标准，规范生产流程，缩短生产周期。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　试验材料采自浙江农林大学铁皮石斛种质资源圃，品种为“鲜食一号”，选用当年新发出的高度在15cm左右的铁皮石斛嫩芽为外植体。 　　1.2 操作方法 　　1.2.1 外植体消毒及原球茎的诱导 　　先将采回来的外植体在自来水下冲洗25min，再转入无菌条件下，用70%酒精消毒30s，然后将整个嫩茎浸入0.1%升汞溶液中，设计13、15、17、20、25min时间梯度进行灭菌，无菌水冲洗3次，吸干表面水分。在无菌条件下，用手术刀将外植体按照顶芽、中段和基部的顺序切成1.5cm左右的茎段，顶芽剥离成2～3mm的块，分别接种在不同激素水平和有机添加物的MS改良培养基表面。接种后45d观察消毒效果和萌发情况，统计萌发率。 　　1.2.2 原球茎增殖 　　将正常诱导获得的原球茎接种在含有不同激素水平组合和不同有机添加物的1/2MS培养基中，观察不同植物激素和有机添加物对原球茎生长状况和增殖的影响。每种培养基接种20瓶，每瓶接种16块原球茎，在接种30、40、50d后统计其增殖情况。 　　1.2.3 生根培养 　　选取高度在2.0～4.5cm的分化苗，并根据苗的大小分成两级，去除基部老化组织，接入生根培养基，每瓶的接种数量为20株。放置于 25±2℃温度下进行生根培养，40d后观察生根、小苗分化及苗高[4]。 　　1.2.4 炼苗移栽 　　将高度≥3cm的已生根瓶苗移到温室炼苗，前5d需要遮光保护，之后再逐渐使之适应正常光照。温度保证夜温不低于15℃，白天不高于30℃为宜。炼苗20～35d，叶色为深绿色时即可出瓶移栽。按每丛3～5株，株距10cm、行距13cm的规格种植在无土基质中，深度以根部被基质完全覆盖为宜[5]。控制栽培环境的光照在1000～13000Lux；温度在15～30℃之间。空气相对湿度以80%为佳，基质要处在潮湿状态但不积水；水的pH值在5.5左右；定植7d后，施用1～2次氮、磷、钾配比为10：30：20，浓度为1000倍的高磷钾肥促其生根[6]。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同处理对外植体消毒及原球茎诱导效果的比较 　　通过观测外植体消毒处理方法的污染率及嫩芽萌发情况，统计结果见表1。 　　由表1中可知，在自来水冲洗和酒精消毒时间一致情况下，当升汞消毒13min时污染率最高，达到85%，只剩余3瓶萌发；当消毒时间在25min时污染率最低为5%，但只有10瓶正常萌发，可以认为消毒时间相对较长，明显影响了外植体的诱导萌发；而消毒时间为17min，污染率在15%的水平，正常萌发的瓶数有17瓶。从而可以得出在5个处理之中，处理3是较为理想的。 　　不同激素的组合对外植体诱导萌发的影响有较大差异，通过观测7个组合40d诱导情况，统计结果见表2。 　　由表2的数据可知，利用6-BA、NAA和2.4-D进行组合，并设定不同的水平，在NAA用量一定的情况下，随着6-BA的用量逐渐增加，诱导率呈现上升的趋势，配合一定量的2.4-D，其作用的趋势与6-BA相似。在7个处理中，处理5的效果相