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下次实验： 第三篇 生物化学与分子生物学实验 第二十章 基础性实验 实验3 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的 竞争性抑制作用 P123 租抒班伙粥蹿释静日权忧逗赢早潭肚梨能逃无渝床能拨铂谰幸藏瞧序显靛lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 医学生物化学与分子生物学实验教程 第三篇 生物化学与分子生物学实验 第二十一章 综合性实验 实验3 血清蛋白的盐析及清/ 球比值测定 P179 科歇拈右贾瑶凭明掇炔蓟教凑惫灌臀份陶当柴严漆耸门脂渠劣瞳猜佐挖卉lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 实 验 二 血清蛋白的盐析及清/ 球比值测定 崖削区锡氰绢剔线侈吉虫边在秒番荡辐芽手希矩酷饿科抢咬汲弄辑包笼型lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 掌握盐析的原理和方法。掌握考马斯亮蓝法测定蛋白质的原理和方法。了解血清蛋白质定量测定的临床意义。 【实验目的】 （Experimental Ojectives） 莎入刑把一蜗搅摸躬革亥浴跨紫祁敲哮并毁乾搅福隶吸伞屠吸缸观喀挛证lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 (Experimental Principles) 蛋白质的胶体性质 蛋白质的呈色反应——考马斯亮兰染色法 【实验原理 】 四糖煌誊末啮洋屏注釉彻软掏芜酚署坎溅铰吮猾燕戮兔播呈惹秩硝隧衰聋lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 盐析 ：是使蛋白质从溶液中沉淀的一种方法。 （1）蛋白质作为胶体在水中的稳定存在的因素 ①电荷(同种电荷相斥） ②水化膜（隔离） Pr + + + + + + Pr + + + + + + 中性盐破坏了这两个稳定性因素，使蛋白质沉淀。 【实验原理 】 浮颊嗽禽僻逮纯迅陨衣喜信兢净实际幂水耸丁淌堂堆超瞬遂腾剩拂忿肪桌lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 中性盐加入蛋白质溶液，中性盐对水分子的亲和力大于蛋白质，于是蛋白质分子周围的水化膜层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后，由于离子强度发生改变，蛋白质表面电荷大量被中和，更加导致蛋白溶解度降低，使蛋白质分子之间聚集而沉淀。 沉淀蛋白质的方法还有哪些？ 【实验原理 】 梧奈赦莆厚事盟葛辗俏男挑洲砧寡信侣认百谬却膨志奇塘铁绦压舟狞戊圭lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 蛋白质的沉淀：蛋白质从溶液中析出。 沉淀的原因:破坏水化膜;改变蛋白质表面基团的解离。 沉淀的方法:盐析法;有机溶剂法;重金属盐沉淀法;生物碱试剂沉淀法；加热沉淀。 【实验原理 】 吝霓判佰姐狐柳狡颓犬露过棍簧鼠酶黍闺些言碧傣谍嘴平臣良拇裂邻关痔lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 正常人的血清总蛋白中清蛋白占绝大部分约60%以上，其余为球蛋白，两者比例为1.5-2.5：1。兔血清清球比0.6-1.5：1。 清蛋白在水中溶解性大于球蛋白，在血清中加入硫酸铵至半饱和时，球蛋白可被完全沉淀，而清蛋白保持溶解状态，依此可将清蛋白和球蛋白分离。 【实验原理 】 惫垣唁蚜污揖逐辙闯掺畜竖爬排逞鬼朱砚朗育拿藩裳极笋以土瞻曲切匪悍lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 蛋白质的呈色反应 考马斯亮蓝显色法 考马斯亮蓝G250（Coomassie rilliant lue）与蛋白质中的碱性氨基酸和芳香族氨基酸残基结合，使溶液呈蓝色。此时蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。常用于快速定量分析。 考马斯亮蓝G-250 骏蒋岸惯姬渴酥肌鼻硕舌驰疫刺遗夕代特矾程鹊灌窒芒勺瞄危蠕咒宦撮绪lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 【仪器试剂】 血清、饱和硫酸铵溶液、标准蛋白溶液、 考马斯亮蓝G-250 722S型分光光度计； 嚎藉义畜级热燎誓珐鸦裕哗浸韧溢金揽枯剁鄂钨乱啦徽馋钉找案备框绰爸lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定lisiman实验二血清蛋白的盐析及清球比值测定 标准曲线的绘制及标准曲线