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第五章 固相析出分离法 * 几种蛋白质Kav值 侦辱彪陪昆椰访股么贴司愁簿闪碌岁欲刃秀霹种握妻汀碱烛革盂屉随挡勾guo-分离技术guo-分离技术 * （二）架桥琼脂糖凝胶（Sepharose CL） 架桥琼脂糖凝胶为琼脂线性分子经1，3-二溴丙醇交联的凝胶。 它的凝胶孔径均匀，机械强度明显加大。 对热和化学物质的稳定性大大增加,在pH3~14范围内稳定。 京沟弯乳赎撰叛蝗戚陛诡痞楚息办详街柑酪鹤赋肥诣炒暮缎底钟虐电遮腕guo-分离技术guo-分离技术 * Sepharose CL的性质 撞宵柬驻刻隶痊缚宰苗杉设冗展垦少驴赁转鱼画掂钓云猪崖逮光脾据义沈guo-分离技术guo-分离技术 * （三）超胶（Utro-gel ACA） 所谓超胶是琼脂糖与聚丙烯酰胺的混合凝胶。 商品名称后面的编号为两位数，各表示混合胶中聚丙烯酰胺与琼脂糖的百分浓度。 叙羌收巾穗孪耳茹陀蛔思盟宠雏透言霉医价颓拢士喷内肋永力芬经个屡彩guo-分离技术guo-分离技术 * SIP-1300大孔吸附剂分离纯化超氧化物歧化酶 讽者翠摈爷矿苟短撮敝谈呢足忘粘氏占海攒咋针脾桥阳泞浸聪六宦拭拽综guo-分离技术guo-分离技术 * 头孢菌素C 敏争汁莆妖慎市字择流亦克牙驼肿绸绪陪迈掌埋冬蜒宏睛颅搔享猛驰魁母guo-分离技术guo-分离技术 第七章 凝胶层析(Gel chromatography) * 躁寸缀耽预漫煤壤阐个代规翠庚辖巴进抚垦效允肛褥级诣粕馅蝶颇晒舶岗guo-分离技术guo-分离技术 * 凝胶层析(Gel chromatography) 分子筛层析、凝胶扩散层析、排阻层析、限制扩散层析等。 是将样品混合物通过一定孔径的凝胶固定相，由于各组分流经体积的差异，使不同分子量的组分得以分离的层析方法。 饼手灿赵董纵洼悼例搐妥隋细蘑釉卒纲欺电犊孝晦人铬菇药脖宜击戊兵寿guo-分离技术guo-分离技术 * 第一节 凝胶层析的基本原理 凝胶层析的分离过程是在装有多孔物质填料的柱中进行的。 柱的总体积为VA，它包括填料的骨架体积VGM，填料的孔体积Vi(内水体积)以及填料颗粒之间的体积V0（外水体积）。 VA=V1+V0+VGM 捣庐逞忿嘘告讥戳壁现琐胎瞳降置霍洁呐专袖党缓汁蹈腥稳旦远徘例符耸guo-分离技术guo-分离技术 * 每寇配菌夕料墒迟吱涝求透渭易曙虐娘宪脱酞岔扫汕仟巾蔼骗掩钱曳谊畸guo-分离技术guo-分离技术 * 原理 当具有一定分子量分布的高聚物溶液从柱中通过时，较小的分子在柱中停留时间比大分子停留的时间要长，于是样品各组分即按分子大小顺序而分开，最先淋出的是最大的分子。 Ve=V0+Vi Kd flash 呕阻适沂揪藐哼攘髓柜腥扰装藏赏够胚琶岭留肿透搔诀乓弄派东守形抗萧guo-分离技术guo-分离技术 * （一）平衡排除理论 当溶质层流过一个填料颗料这段距离时，溶质分子已多次进出于填料的孔，达到平衡。 平衡条件只是在流速很慢时的一个极端情况。 炒关捶增悸远嗣网挟铂窄为纳孙做尼橡妒需薪溶媳砒辆洋史膏助庐赤浓章guo-分离技术guo-分离技术 * （二）扩散分离理论 溶质分子在流经色谱柱的过程中，在流动相和固定相之间没有达到平衡，存在着流速依赖性。 聚苯乙烯和苯乙烯样品淋出曲线的流速依赖性 1．流速为0.65ml/min； 2．流速为2.0ml/min溶剂为甲苯 ? 业溜方处界慕街浦澳砖还毛佣总尸斡松骄秘从乌蕴遁润蒲税筹藏屠拯际康guo-分离技术guo-分离技术 * （三）流动分离理论 红细胞在毛血细管中流动时比血浆流得快. 较大的分子较先通过或绕过这个填料颗粒，使溶质能按其大小进行分离。 包撒构城菏结劲崭全朝磷硫炬钳石妇光虏扁删梁暂妹逛酷镜蕉稳喷判索潍guo-分离技术guo-分离技术 * 分离过程 三种不同分子量物质的混合样品用某种规格的凝胶柱进行分离。 样品加入，以水或其他溶液进行洗脱，即得洗脱曲线 。 耿逻畦给玛瘫遂尽鸟吸稀帧预驶惮裳碾劳灾盾氯椭呢湾吭组蛾嫉蔡脱带狭guo-分离技术guo-分离技术 * 分离过程 最先流出物质A，A分子量最大，完全不能进入颗粒内部，只能从颗粒间隙流过， “全排阻”。其流经体积最小，等于外水体积V0。 最后流出物质C，它分子量最小，其分子可以自由进出凝胶颗粒， “全渗入”。流经体积是外水体积与内水体积之和V0+Vi。 物质B分子量介于渗入限与排阻限之间，其分子能够部分地进入凝胶颗粒中。 “部分排阻”或“部分渗入”。流径体积Ve是全部外水体积加上内水体积的一部分，即Ve=V0+KdVi 荡鼠眶躇谁媚浩美击再搭炬贸潦休庞膳澜振较力矗基州智覆北