实验二十五聚丙烯酰凝胺胶电泳.docVIP

实验二十五 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 测定蛋白质相对分子质量 一、目的要求 1、掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法的原理。 2、巩固垂直板电泳的基本操作。 3、学会用该方法测定蛋白质的相对分子量。 二、原理 聚丙烯酰胺凝胶电泳具有较高分辨率，用它分离、检测蛋白质混合样品，主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所造成的电泳迁移率的差别。1967年，Shapiro等人发现，在聚丙烯酰胺凝胶中加入十二烷基硫酸钠(sodium dodecylsulfate，SDS)后，与SDS结合的蛋白质带有一致的负电荷，电泳时其迁移速率主要取决于它的Mr(相对分子质量)，而与所带电荷和形状无关。 当蛋白质的Mr在15000～200000之间时，蛋白质的Mr与电泳迁移率间的关系可用下式表示： lgMr=K-bm 图1 37种蛋白质的Mr对数与电泳相对迁移率关系图 Mr范围为11000～70000， 10％凝胶， pH=7.2, SDS-磷酸盐缓冲系统 式中，Mr为蛋白质的相对分子质量；m为迁移率；b为斜率；K为截距。均为常数。在条件一定时，b和K将已知相对分子质量的标准蛋白质的迁移率对Mr的对数作图，可得到一条标准曲线(如图1)。将未知相对分子质量的蛋白质样品，在相同的条件下进行电泳，根据它的电泳迁移率可在标准曲线上查得它的相对分子质量