实验十一激素对血糖浓度的影响.doc

实验十一 激素对血糖浓度的影响 【目的】 1.掌握血糖的测定原理及方法。 2.掌握血糖的正常范围及意义。 3.熟记胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响并解释其作用机制。 【原理】 人和动物体内的血糖浓度均维持在一定范围内。这是由于体内存在多种激素及调节物质，在它们的共同作用下，使糖酵解、糖氧化、糖原合成与分解、糖异生、脂肪合成与分解等代谢途径协同进行。胰岛素可通过以下几种途径降低血糖：①促进肌肉、脂肪细胞的载体转运葡萄糖人内；②抑制蛋白激酶A，继而使糖原磷酸化酶活性降低：激活糖原合酶脱磷酸酶，从而使糖原合酶活性升高，加速肌肉、肝脏的糖原合成；③通过第二信使间接激活丙酮酸脱氢酶，加速丙酮酸氧化脱羧生成乙酰CoA；④抑制磷酸烯醇式丙酮酸激酶活性，促进氨基酸进入肌肉合成蛋白质，从而降低糖异生；⑤抑制脂肪动员，促进糖有氧氧化。肾上腺素的作用与胰岛素相反，起升高血糖的作用。肾上腺素升高血糖的作用迅速而明显，它通过与肝和肌肉细胞膜受体结合而激活磷酸化酶，产生级联放大效应，从而加快糖原的分解、肝释放葡萄糖、肌肉输出乳糖供肝糖异生等，最终导致血糖升高。 本实验观察家兔在注射胰岛素和肾上腺素前后空腹血糖浓度的变化。血糖含量的测定采用葡萄糖氧化酶法。首先用钨酸钠及盐酸沉淀血清中的蛋白质，制备血滤液。在葡萄糖氧化酶的催化作用下，血滤液中的葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，并产生1分子过氧化氢；过氧化氢被偶联的过氧化物酶催化放出氧，氧将试剂中的4-氨基安替吡啉偶联酚(还原性氧受体)的酚氧化，生成红色的醌类化合物，其颜色深浅与葡萄糖的含量成正比，此溶液与经同样处理的标准葡萄糖溶液进行比色测定，即可求出血糖含量。 葡萄糖氧化酶 葡萄糖——————葡萄糖酸+H202 过氧化物酶 H20——————H20+02 O2+4-氨基安替吡啉偶联酚——————醌类化合物（红色） 葡萄糖氧化酶法测定血糖的特异性较高，能干扰测定结果的物质较少，如溶血样本血红蛋白浓度达lOg／L、黄疸样本胆红素浓度达342Um以及样本中所含的少量尿素、肌酐、甘油三脂等均不影响测定结果。 人空腹血糖正常范围约为3.9-6.1mM(70~110mg／d1)。 糖尿病、颅内高压等可引起血糖升高，胰岛细胞增生或癌瘤可使胰岛素分泌过多，导致低血糖。 【器材】 仪器：台秤、5415D型离心机、恒温水浴箱、TU—1800分光光度计、吸量管、比色杯、大试管、可调式移液器、 耗材：家兔两只(体重2~2.5kg)、一次性注射器及针头、一次性小试管、2mlEp管、200ul吸头。 【试剂】 1、3.8％柠檬酸钠(抗凝剂) 柠檬酸钠 3．8g 加H20 定容至100ml 2、肾上腺素(1mg／m1) 3、胰岛素(40U／m1) 4、蛋白沉淀剂 无水磷酸氢二钠 10g(O.07mM) 钨酸钠 10g(32mM) 1M盐酸 125ml(125mM) 加H20 定容至1000ml 5、标准葡萄糖原液(1mg/m1) 准确称取葡萄糖 1g 0.2％苯甲酸溶液 定容至1000ml 充分混匀，置于4℃冰箱保存，此液甚稳定。 6、标准葡萄糖应用液（0.05mg/ml） 取标准葡萄糖溶液 10ml 加H20 定容至2000ml 充分混匀。 置于4℃冰箱保存，0.2％苯甲酸稀释液可在室温下长期保存。 7、酶酚混合试剂(又称血糖单一试剂，公司购买) 8、75％酒精 9、二甲苯 【操作】 1—3步全班可只做一份 1.取正常家兔两只，实验前预先饥饿16小时，称重。 2.耳缘静脉取血：去毛，用75％酒精擦耳缘静脉，使血管充血(亦可用二甲苯擦拭以达到扩张血管的目的)。分别用一次性注射器耳缘静脉取血2ml，分别置于含抗凝剂的一次性试管中(每m1全血约加0.15ml 3.8％柠檬酸钠)，边收集边混匀，以防凝固。用干棉球压迫血管止血。一次性试管标明胰前、肾前。 3.注药：取血后，于家兔腹部皮下注射药物。其中一只注射胰岛素，剂量为每公斤体重1.5U(1.5U／kg)；另一只注射肾上腺素，剂量为每公斤体重0.4mg(0.4mg/kg)，并记录注射时间，30分钟后再取血，置于标有胰后、肾后标记的一次性试管中，混匀备用。 4.血滤液制备(四人一组)：取4支2.0mlEp管，分别标明胰前、肾前、胰后、肾