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HPLC法测定呋塞米中有关物质的含量 作者：wangyu 科研信息来源：文献资料 点击数： 228 更新时间：2007-12-3 [关键词]：呋塞米,高效液相色谱法,利尿药,托拉塞米,布美他尼 健康网讯： 呋塞米(Furosemide)是一种强效利尿药，应用于临床已 30余年，其标准已被2005年版《中国药典》（二部）收载。近 20年来除了托拉塞米和布美他尼，注射剂利尿药很少有新的品种产生、呋塞米注射液是一个比较成熟的品种，临床用量非常大）从呋塞米化学结构来看，呋塞米具有酰胺基，易被氧化分解，注射液的稳定性不够理想，而注射用吠塞米却能很好的解决这个问题。由于现有《中国药典》标准中还未见注射用呋塞米中有关物质的含量控制项，故笔者建立了测定注射用呋塞米中有关物质含量的高效液相色谱法。 1　仪器与试药 Shimadzu 10-VP高效液相色谱仪及CLASS-VP色谱工几作站（日本岛津公司）。 呋塞米原料药（江苏亚邦药业有限公司，纯度：99.7%，批号：030801）；注射用呋塞米（湖南中南科伦药业有限公司，规格：20mg，批号20050221；呋塞米注射液（山西省某药厂、安徽省某药厂、黑龙江省某药厂、海南省某药厂、河南省某药厂，规格均为每支20mg，批号：200609201、 061201061101、060901）：四氢呋喃为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为超纯水 2　方法与结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil-ODS（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：水-四氢呋喃-冰醋酸（70;30:1）；检测波长：254nm；流速：1.OmL·min-1；进样量：20μL。 2.2　溶液的制备 2.2.1　对照品溶液：精密称取呋塞米原料药适量，加流动相溶解并稀释制成浓度为1mg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。 2.2.2　样品溶液：取样品5瓶，倾出内容物，研细，准确称取适量（约相当于呋塞米25mg），置于25mL棕色容量瓶中，加流动相溶解并稀释制成浓度为1mg·mL-1的溶液，作为样品溶液。 2.2.3　空白样品溶液：取按处方比例及制备工艺制备的不含主药的空白辅料适量，按“2.2.2”项下方法制成空白样品溶液。 2.3　线性关系考察 避光操作。精密称取呋塞米原料药50 000μg，置于25mL 容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；精密量取贮备液5、2.5、1、0．5、0.25mL，分别置于lOmL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得系列溶液（包括贮备液）。分别按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。以浓度（C）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行回归分析，得回归方程A= 19 519C+823 572（r=0.9997）。结果表明，呋塞米检测浓度的线性范围为50～2 OOOμg·mL-1。 2.4　专属性试验 2.4.1　高温破坏：取样品（批号适量（约相当于呋塞米25mg），置于25mL容量瓶中，于105℃烘箱中放置6h冷却，加入流动相溶解并稀释制成浓度为1mg·mL-1的溶液，按 “2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。HPLC详见图1。 2.4.2　酸破坏：取样品（批号适量（约相当于呋塞米25mg），置于25mL容量瓶中，加入0.1mol·mL-1盐酸溶液（简称稀盐酸）2mL，放置Zh后加0.1mol·mL-1氢氧化钠溶液（简称稀氢氧化钠）2mL中和，再加人流动相稀释制成浓度为1mg·mL-1的溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。HPLC详见图1。 2.4.3　碱破坏：取样品（批号适量（约相当于呋塞米25mg），置于25mL容量瓶中，加入稀氢氧化钠2mL，放置 2h后加稀盐酸2mL中和，再加入流动相稀释制成浓度为 1mg·mL-1的溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。HPLC详见图1。 2.4.4　氧化破坏：取样品（批号适量（约相当于呋塞米25mg），置于25mL容量瓶中，加过氧化氢溶液2mL，放置 2h，用流动相稀释制成浓度为lmg·mL-1的溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱。HPLC详见图1。 由图1可知，各项专属性试验中，呋塞米主峰与其它杂质峰均分离很好。 2.5　精密度试验 2.5.1　进样精密度：精密称取样品（批号适量，用流动相溶解并稀释成浓度为1mg·mL-1的溶液。按“2.1”项下色谱条件重复进样测定5次，以相对主峰保留时间约0.4的有关物质峰面积计算。结果，RSD=6.90％。 2.5.2　方法精密度：精密称取同一批样品（批号：20