背景知识六：菌种保藏技术.pptVIP

是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的方法 冷冻干燥保存的菌种存活时间长、变异率低、效果好，便于大量保藏，还具有体积小、不易污染、便于运输等优点 缺点是设备和操作都比较复杂。 （4）液氮冷冻保藏法： 原则是“慢冻快融” 许多细菌可保藏15年以上。 ?此法除适宜于一般微生物的保藏外，一些用冷冻干燥法都难以保存的微生物如支原体、衣原体、氢细菌、难以形成孢子的霉菌、噬菌体及动物细胞都适用 准备安瓿管 加保护剂与灭菌 能耐受温度突然变化 霉菌菌丝体：安瓿管内预先加入保护剂 接菌种入安瓿管细菌10％的甘油蒸馏水菌悬液 霉菌菌丝体用灭菌打孔器切取菌落圆块 用火焰熔封，浸入水中检查 冻结以每分钟下降1℃的慢速冻结至-30℃ 保藏立即放入液氮冷冻保藏器内（气相为 -150℃，液态氮内为-196℃） 恢复培养：需用时，将安瓿管取出，立即放入38—40℃的水浴中震荡，1分钟内全部融化。再打开安瓿管，将内容物移入适宜的培养基上培养 防爆炸、防冻伤，要戴皮手套操作。 低于-130℃微生物代谢停止，处于休眠状态 优点：保藏期长、变异率低、效果好、方法简单、保藏的对象也最为广泛 缺点：需要特殊设备、 液氮消耗较多费用较高 4、菌种保藏机构 美国标准菌种收藏所 ATCC采用冷冻干燥保藏法和液氮保藏法来保藏所有菌种。 中国微生物菌种保藏委员会CCCCM采用斜面低温保藏法、冷冻干燥保藏法和液氮保藏法进行菌种保藏。 ATCC采用的两种保藏方法的优点示意图 至少在20年内， 获得该菌种的用户， 至多只是原种的第二代 （三）几种杂交的结果： 1.F+ 与F-的杂交 杂交的结果：供体菌和受体菌均成为F+细胞 没有供体菌染色体DNA的转移 2. Hfr 与F- 的杂交 杂交后的受体细胞仍然是F- 部分供体菌DNA染色体转移到受体菌中 3. F′与F-杂交 受体细胞也就变成了F′ 部分宿主细胞的DNA随F′因子进入受体菌细胞 （四）原生质体融合 是将遗传性状不同的两种菌融合为一个新细胞的过程 主要包括原生质体的制备、原生质体的融合、原生质体再生和融合子的选择等步骤。 知识节点三 真核微生物的基因重组 一、有性杂交 一般指性细胞间的接合和随之发生的染色体重组，并产生新遗传型后代的一种育种技术 二、准性生殖 是一种类似于有性生殖，但比有性生殖更为原始的一种生殖方式，它可使同种物两个不同菌株的体细胞发生融合，并不经过减数分裂就能导致基因重组的生殖过程 准性生殖和有性生殖的比较 知识节点四 微生物育种 微生物菌种选育途径：自然选育、定向选育、诱变育种、杂交育种 一、利用自发突变进行的育种 （一）自发突变原因 1.环境因素对微生物的诱变作用 各种短波辐射和高温等 2.DNA复制 3.微生物自身产诱变物质 （二）自发突变与育种 1.自然选育 在日常生产过程中，不经过人工处理，利用菌种的自发突变，从而选育出优良菌种的过程 2.定向育种 是指在某一特定条件下，用某一特定因素长期处理某微生物的群体，同时不断地对它们进行移种传代，以积累自发突变，并最终获得优良菌株的过程 二、诱变育种 指用人工的方法处理均匀而分散的微生物细胞群，促使它们发生突变，再从中筛选出符合要求的突变菌株，供生产和科学实验用 （一）诱发突变原因——诱变剂 1.物理因素的诱变 （1）紫外线 （2）x射线和r射线 （3）热和激光等 2.化学因素的诱变 （1）碱基结构类似物 5-溴尿嘧啶（5-BU）、5-氨基尿嘧啶（5-AU）、8-氮鸟嘌呤（8-NG）、2-氨基嘌呤（2-AP）和6-氯嘌呤（6-CP） （2）与核酸上碱基起化学反应的诱变剂 结果使A → H（次黄嘌呤） G → X（黄嘌呤） C → U（尿嘧啶） （3）移码突变 （二）诱变育种 诱变育种的基本过程如图： 1.诱