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克隆技术研究 小研究生：初一（IBMYP）班郭颖瑜（13岁） 梁俭菲（13岁） 袁 韬（13岁） 初一（2）班王 涓（12岁） 何源远（12岁） 导师：初中部教师 王练强 导师的话 “对于我说，今天是一个很重要的日子。因为我不仅踏进了真正的大学，而且将要研究高科技的生物技术——植物组织培养，也就是现在流行说的植物克隆。 今天，对我来说实在是太重要了。我不仅走进了大学，还学会这么多大学时候才能学到的东西。我想，大学，我已经一步步地向你靠近！” 这是摘自学生在开展个性特长课程学生日记的两句话。有了个性特长课程，也就有了学生的“大学”，学了什么？请看《美国芦荟克隆的研究》—— 美国芦荟克隆的研究 课题组全体成员 一、选题 当初中部的《克隆人能否诞生》科普讨论课顺利降下帷幕时，我部有一批同学报名参加克隆研究课题小组。经过导师王练强的严格挑选，我们五人成立了克隆研究课题组，并提出了以下几个课题： 克隆人真的会诞生吗？ 动物能克隆，植物行吗？ 克隆人能否诞生？ 人的智慧能克隆吗？…… 同学们通过热烈的讨论认为，能自己动手去研究现代的克隆技术最好。于是我们都迫切要求导师能教我们在克隆的技术。王老师按照我们选定的课题，讲述了很多克隆研究的基本知识，尤其是我们目前着手研究的植物克隆技术，王老师讲的更深入一些，又介绍了国内外对植物克隆的研究情况。当介绍到目前华南师大生物系正在克隆美国芦荟的进展情况和发展的前景时。同学们非常兴奋，一致决定要研究这个项目，题目就定为“美国芦荟克隆的研究”。 我们查找资料知道芦荟是百合科，属多年生植物，原产于南非及马达加斯加岛等地，在世界各地分布很广。芦荟种类有三百多种，而利用价值较高的仅有四、五种，如美国翠叶芦荟（又称库拉索芦荟）、日本木剑芦荟、中华芦荟和开普芦荟等。其中尤以美国翠叶芦荟最具有药用和美容功效，其深加工产品如饮料、保健品、药品和美容化妆品等也早已走进千家万户。 二、研究过程 根据植物克隆（又叫植物组织培养）的技术和有关的要求，我们把研究的过程分为四个阶段：一是MS培养基的制作，二是消毒和灭菌，三是接种，四是培养。 （一）培养基制作 培养基，一个挺陌生的名词。培养基是什么？培养基是为培养植物细胞而设计的，有较高的浓度，保证组织生长所需的矿物质营养和加速愈伤组织生长的物质。总之，培养基里面含有植物生长需要的营养物质。培养基有很多种，我们用哪一种呢？ 1、选用什么培养基好？ 课题组在研究培养基时，同学们在网上查找大量的培养基和培养基配方，发现各种培养基都有各自的特点：MS培养基适合固体培养，无机盐的数量和比例适中，能满足大多数植物的生长。B6培养基含铵较多，对某些植物生长有好处。N6培养基主要用于花的培养。White 培养基是含浓度低的无机盐，主要用于胚的培养。我们采访了华南师大的植物克隆专家，他们也认为MS培养基比较适合美国芦荟的生长，因此，课题组成员决定采用MS培养基。 2、培养基的具体制作： （1）从母液中取出所需要的大量元素、微量元素、铁盐、维生素以及植物激素等，放于烧杯中； （2）煮琼脂，加热并要不断搅拌，琼脂煮沸约十几分钟后便会溶解，呈透明状； （3）琼脂溶解后，加入从（1）中所取出的各种药物及糖，同时要不断搅动培养基使其混合均匀； （4）用“PH计”或“PH试纸”测PH值。用浓度为1摩尔氢氧化钠或1摩尔盐酸将培养基调至适合的PH值，通常为PH=5.8； （5）将调配好的培养基用漏斗或分装器分装到培养用的玻璃瓶内。这些玻璃器皿要事先清洗干净、烤干。琼脂约在40℃时才凝固。 （6）将分装好的培养基容器盖上盖，标上记号准备高压灭菌。 这样，就把培养基做好了。 （二）灭菌 大家都知道，培养基是最有利于植物、细菌和真菌繁殖的物质，如果在实验的过程中落入细菌或真菌孢子，整个实验就会失败。如何防污染？我们研究和实践后认为要注意以下3点： 1、保持实验室的绝对干净。实验前要对实验室进行紫外线灯灭菌20分钟，如是超净工作台则开机过滤空气15-20分钟。 2、器具消毒灭菌。首先用清水洗净，然后用中性洗涤剂洗，再用清水冲洗数次，接着用蒸馏水洗2-3次，最后就是晾干备用，烘干灭菌。将洗净的器具置于烘干箱，150℃烘2小时，即可达到灭菌目的。 3、材料消毒。美国芦荟外植体用漂白粉消毒，浓度一般为5-10%，也可以用饱和溶液。消毒时间为10-20分钟。 4、培养基的灭菌。MS培养基在120摄氏度，压力保持在1.1千克/平方厘米，20分钟后即可高压灭菌。 5、规范的无菌操作法。组培技术是一种无菌技术，除了保持工作室清洁无菌外，工作人员也要注意不带细菌，要剪除指甲，穿工作服，带工作帽和口罩。操作前先用肥皂洗手，操作时用70%酒精擦手灭菌。接种时，需在近火焰上方打开培养