生化大实验--AKP-碱磷酶的表达与纯化幻灯片.pptVIP

AKP的表达与纯化 2008年春季学年·研究生班 佟丽 一、AKP简介 二、蛋白纯化常用技术 三、AKP表达纯化 纯化方案的评估 纯化方案的评估 酶活测定 蛋白浓度的测定 * * 大肠杆菌碱性磷酸酶(也称大肠杆菌碱性磷酸酯酶， E.coli alkaline phosphatase，简称AKP/ALP，EC.3.1.3.1) ，在碱性环境下能水解多种磷酸单酯化合物的酶，需要镁和锰离子为激活剂。 AKP三维结构模拟图 碱性磷酸酶的不同分子状态 碱性磷酸酶的理化性质 6.0 at pH8.0 6.2S 9.6S 3.4cm3/g 3.3×10-5cm2/V sec at pH7.6 pH 4.5 pH 6.3 1.05 (67-98)×103 at pH8.0 (88-99)×103 at pH8.0 (86-110)×103 at pH8.0 0.72 Mg2+，Mn2+，Zn2+，Ca2+ 氰化物, 焦磷酸盐 85℃加热30分钟仍保留活性，Mg2+存在时可增加酶的热稳定性 沉降系数(单体) 沉降系数(二聚体) 沉降系数(四聚体) 固有粘度 电泳迁移率 等电点 等离子点 摩擦比率 MWw MWz MWZ+1 吸光率(278nm for 1mg/ml) 激活剂 抑制剂 热稳定性 1. 破碎 机械法、溶胀和自溶、化学处理、生物酶降解 2. 分 离 纯 化