第一节免疫标记技术的基本概念.ppt

1、免疫测定技术 2、免疫组化技术 按测定用途划分的类型 第二节 酶联免疫吸附试验 一、ELISA技术的原理与方法 二、 ELISA技术的操作注意要点 ELISA技术的原理与方法 间接法 夹心法 竞争法 间接法 夹心法 竞争法 酶标仪 酶标仪 ELISA技术的操作注意要点 试剂器材 操作环节 合适工作浓度 第三节 荧光抗体技术 一、荧光抗体技术的原理与方法 二、荧光抗体技术的操作注意要点 * 第一节 免疫标记技术的基本概念 一、免疫标记与标记免疫的概念 二、常用的免疫标记物质 免疫标记与标记免疫 免疫标记技术： 标记物与免疫活性物质的联接技术 标记免疫技术： 以标记免疫物质检测相应靶物质的技术 常用的免疫标记物质 类别 标记物 用途 荧光素 FITC、RB200、TRITC 免疫组化 镧系元素螯合物 免疫分析测定 放射性核素 3H、14C、32P、57Gr 免疫分析测定 125I、131I 酶 HRP、AP 免疫组化 免疫分析测定 化学发光物 Luminol、lucigenin 免疫分析测定 金属颗粒 胶体金、铁蛋白 免疫组化 免疫分析测定 第二节 酶标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与鉴定 常用标记方法 1、常用酶 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） 2、标记方法 戊二醛交联法 过碘酸盐氧化法 戊二醛交联法 (一步法） 抗体-NH2 + COH-（CH2）3-COH + NH2-酶 抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶 抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-抗体 酶-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶 戊二醛交联法（二步法） COH-（CH2）3-COH + NH2-酶 抗体-NH2 + CHO-（CH2）3-CH = NH2-酶 抗体-NH2 =CH-（CH2）3-CH = NH2-酶 过碘酸盐氧化法 O O O O O O NaIO4 O O OH O O OH OH + NH2抗体 O O O N N 抗体 抗体 H2O N 抗体 NaBH4 Schiff碱 酶-五炭糖环 标记免疫物的分离与鉴定 1、分离 目的：去除游离酶 方法：盐析、柱层析 2、鉴定 抗体活性 酶活性 标记物纯度 第三节 荧光标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化 常用标记方法 1、荧光素的概念 2、生物标记荧光素的要求 3、常用荧光素标记原理与方法 生物标记荧光素的要求 1、具有与蛋白质共价结合的能力 2、荧光效率高 3、能与背景物质形成鲜明对比 4、不影响蛋白质的生物、免疫活性 5、标记方法安全、简便 6、标记物稳定，易保存 FITC的标记原理与方法 荧光素-N=C=S + NH2-抗体 荧光素-N-C-N-抗体 H S H RB200的标记原理与方法 荧光素-SO3Na + PCl5 荧光素-SO2 Cl + PCl3 + NaCl 荧光素-SO2 Cl + NH2-抗体 荧光素-SO2 -NH-抗体 + HCl 标记免疫物的分离与鉴定 1、分离 目的：去除游离荧光素 方法：柱层析 2、鉴定 抗体活性 标记物结合度 F/P比值的应用意义 第四节 放射性核素标记技术 一、常用标记方法 二、标记免疫物的分离与纯化 常用标记方法 1、常用放射性核素 2、125I 的标记方法 直