川芎嗪样品制备与色谱条件.doc

川芎嗪的样品制备与色谱条件 方法一: 溶液制备及线性关系考察: 对照品溶液：精密称取川芎嗪对照品6 mg置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为川芎嗪对照品储备溶液(0．6 mg/mL )，对照品溶液由此稀释。精密吸取对照品储备液(0．6 mg/mL )适量，分别用甲醇稀释成浓度为0．3，0．6，1．2，2．4，6．0，12，24ug/mL 的对照品系列溶液。各取10ul进样，按上述色谱条件测定峰面积。以对照品峰面积为纵坐标，以对照品浓度(ug/mL )为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程 供试品溶液：精密称取川芎0．8 g，加80％乙醇4．8 mL，回流提取2 h，过滤，残渣同法再提取1次，合并两次提取液，回收乙醇，浸膏用甲醇溶解，并转移至10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。 色谱条件：色谱柱：Xttera C18(4．6 mm×250 mm，5 um)；流动相：甲醇一10mmol/L 醋酸铵(pH=9．05)一四氢呋喃(19：81：2)；流速：0．6 mL/min；检测波长：281 nm；柱温：室温；定量方法：外标法；理论塔板数以川芎嗪峰计算，应不低于8000。 方法二： 溶液制备及线性关系考察: 对照品溶液: 精密称取盐酸川芎嗪对照品5.58 mg(折合川芎嗪3.64 mg ), 置于25mL 量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度, 摇匀。精密量取1.0mL, 置50mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀。精密吸取对照品溶液2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0 uL, 注入高效液相色谱仪, 按上述色谱条件依次测定。以进样量X ( ug)为横坐标, 峰面积Y 为纵坐标, 绘制标准曲线, 得回归方程。 供试品溶液：精密称取川芎样品粉末(过3号筛) 3 g, 置具塞锥形瓶中, 精密加入甲醇50mL, 称定重量, 放置过夜, 超声处理(功率100W, 频率40 kH z) 40 m in, 放冷, 再称定重量, 用甲醇补足减失的重量, 摇匀, 滤过。精密量取续滤液25mL, 加1mol/l 盐酸甲醇溶液0.4 mL 调pH 至2 ~ 3, 50摄氏度减压蒸干。残渣加1 mol/l盐酸15 mL 使溶解, 滤过。精密量取续滤液25mL, 加1mol/l盐酸甲醇溶液0.4 mL 调pH 至2 ~ 3, 50摄氏度 减压蒸干。残渣加1 mol/l盐酸洗涤滤纸, 洗液与滤液合并, 加浓氨水2.5mL调pH 9~ 10, 用二氯甲烷萃取2次( 20, 15 mL) , 合并二氯甲烷液, 加1 mol/l盐酸甲醇溶液0.5 mL调pH 至2~ 3, 50摄氏度 减压蒸干。残渣加甲醇2 mL 使溶解, 用0.45 um 微孔滤膜滤过, 即得。 色谱条件: 色谱柱: Phenomenex Gemini C18 ( 250mm, 4.6mm, 5um ); 流动相:甲醇- 四氢呋喃- 20mmol/ L- 1醋酸铵水溶液( pH 9.5) ( 68：7 ：425); 流速:1．0mL/min; 检测波长: 280 nm; 柱温: 35℃; 对照品溶液进样量5uL, 供试品溶液进样量20uL; 理论塔板数按川芎嗪峰计算应不低于5000。 方法三： 溶液制备及线性关系考察: 对照品溶液: 精确称取川芎嗪对照品适量，用色谱甲醇定容至50ml,超声10分钟，即得对照品溶液。精密量取上述川芎嗪对照品溶液（0.308mg/ml）0．1、0．2、0．4 0．6、0．8、1．0 ml，置于10 ml量瓶中，精密加入色谱甲醇溶液至刻度，摇匀，配制成川芎嗪浓度分别为3.08、6.16、12.32、18.48、24.64、30.8 ug/ml，的对照品溶液。精密吸取上述溶液各10ul，进样，按照上述色谱条件进行测定，记录各色谱图，以川芎嗪对照品的质量浓度( ug/m1)为横坐标 ，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 供试品溶液：取川芎粉末10.0g,加10倍量的95％乙醇水浴回流提取1h，滤过，滤液浓缩至浸膏，转移至蒸发皿中，至60℃真空干燥箱中干燥24h。取干燥后浸膏粉适量，置于50ml烧杯中，加30ml色谱甲醇至溶解，静置，移液管移取3.00ml滤液，置于10ml量瓶中，精密加色谱甲醇溶液至刻度，摇匀。再移取3.00ml稀释液，置于10ml量瓶中，精密加入色谱甲醇溶液至刻度，摇匀，再经0.45um微孔滤膜过滤，即得。 色谱条件: 采用Kromasil C18(200mm,4.6mm 5um)色谱柱，流动相：甲醇—0.1%磷酸=40:60，流速：1.0ml/min，检测波长：294nm，柱温：30℃，进样量：10ul。 方法四： 溶液制备及线性关系考察: