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医学免疫学实验讲义 （供临床医学、口腔、护理、药学、预防医学等使用） 青岛大学医学院免疫学教研室 二00六年六月 目录 实验一 直接凝集反应——血型………………………………………（1） 实验二 类风湿因子胶乳凝集试验……………………………………（3） 实验三 抗链球菌溶血素“O”胶乳试验………………………………（4） 实验四 试管凝集反应…………………………………………………（5） 实验五 单向琼脂扩散试验……………………………………………（8） 实验六 双向琼脂扩散试验……………………………………………（10） 实验七 对流免疫电泳…………………………………………………（13） 实验八 火箭电泳………………………………………………………（16） 实验九 免疫电泳………………………………………………………（19） 实验十 补体在溶血反应中的作用……………………………………（21） 实验十一 密度梯度离心法分离单个核细胞…………………………（23） 实验十二 E玫瑰花环形成实验………………………………………（24） 实验十三 人外周血Ｔ淋巴细胞亚群的检测…………………………（27） 实验十四 淋巴细胞转化试验…………………………………………（29） 实验十五 动物过敏性休克……………………………………………（32） 实验十六 肥大细胞脱颗粒试验………………………………………（33） 实验十七 中性粒细胞的吞噬作用……………………………………（36） 实验十八 巨噬细胞的吞噬作用………………………………………（37） 实验十九 间接免疫荧光法检测抗核抗体……………………………（39） 实验二十 酶联免疫吸附试验…………………………………………（42） 实验二十一 免疫层析实验……………………………………………（45） 实验二十二 血清三碘甲状腺原氨酸（T3）放射免疫测定…………（47） 实验二十三 免疫印迹实验……………………………………………（50） 实验室规则 一、每次实验前必须将有关的课堂讲授理论及实验讲义进行预习，以了解本次实验内容及目的、方法，以免发生错误，并可提高实验效果。 二、进入实验室必须穿隔离衣。不准穿拖鞋。 三、在实验室内绝对禁止吸烟及饮食。 四、一切标本及材料应严格按照指定的方式进行使用及观察，不得随意乱动，更不得携出室外。 五、凡用过的吸管、玻片应放在指定的消毒缸内，其他物品也应放在指定地点，不得乱放。 六、应爱护显微镜，用完后应清洁镜头，显微镜对号入座。 七、实验完毕后，整理桌面、地面、用具等，需培养的物品要放入孵育箱，关好水、电、门窗。 八、爱护公物，损坏公物，应向教师报告，进行登记，酌情处理。 九、应用易燃品要严防火灾，严禁酒精灯互相直接碰头点燃，以免酒精外溢，引起燃烧。 十、必须认真观察实验结果，按时交实验报告。  实验一 凝集反应（Agglutination）——血型 颗粒性抗原与相应的抗体在一定条件下出现凝集物的现象称为凝集反应，或称直接凝集反应（direct agglutination）。若将可溶性抗原吸附或偶联至无关载体颗粒，使之成为致敏的载体颗粒，再与相应抗体结合而出现的凝集现象称为间接凝集反应（indirect agglutination），如果载体颗粒是红细胞，则称间接血凝。如将抗体吸附在载体颗粒上，然后与相应的可溶性抗原结合而出现的凝集现象称为反向间接凝集反应。 一、原理 红细胞表面具有不同的抗原，而在人类血清中天然存在有对红细胞的不同凝集素（抗体）。当红细胞与相应凝集素混合时，在有电解质参加下，可以产生凝集现象。根据人类红细胞膜上抗原的不同，可分为Ａ、Ｂ、Ｏ和ＡＢ四种血型。Ａ型血的红细胞膜上有Ａ抗原，血清中则含有抗Ｂ抗体；Ｂ型血红细胞膜上有Ｂ抗原，血清中含有抗Ａ抗体；Ｏ型血红细胞膜上不含Ａ和Ｂ抗原，血清中含有抗Ａ和抗Ｂ抗体；ＡＢ型血红细胞膜上同时有Ａ和Ｂ两种血型抗原，血清中无抗Ａ和抗Ｂ抗体。当不同血型的人进行输血时，红细胞表面抗原与相应的凝集素结合，在补体的作用下可发生溶血现象，故临床上给病人输血时，必须进行血型鉴定。同时尚需进行交互配血试验，以复查定型时有无错误，或其它不规则凝集素的存在。 二、材料 (一)标准抗A及抗B血清。 (二)生理盐水，小试管，毛细吸管，载玻片，牙签或小玻棒，刺血针，酒精棉球等。 三、方法 (一)用酒精棉球消毒被检者的耳垂或指尖，用刺血针扎破皮肤，然后用毛细吸管采血，并将其注入含生理盐水的小试管内，混匀使之成为血球悬液(浓度为1％)。 (二)取洁净玻片一张，用蜡笔在中间划分为二，并于其上角分别标记“抗A”“抗B”，分别将标准抗A和抗B血清加一滴于其上。 (三)用毛细吸管取待检红细胞悬液各加一滴于抗A及抗B血清