毛头鬼伞菌丝体培养条件的筛选.doc

毛头鬼伞菌丝体培养条件的优化 Optimal Conditions for the Mycelial Growth of Coprinus comatus Strains Myoung-Jun Jang , Yun-Hae Lee , and Young-Cheol Ju;Mushroom Research Station, GARES, Gyeonggi Province Gwang-ju 464-870, Korea. Jun-Jie Liu ;Edible Fungi Institute Liaoning Academy of Agricultural Sciences, 84 Dong Ling Road Shenyang, China. 文献来源：Mycobiology 37(2) : 103-108 (2009) 摘要 本研究的主要目的是获得人工培养的毛头鬼伞菌丝体的生长特征数据。运用12URP引物来分析毛头鬼伞的遗传关系，并将结果分成三组，在六组待选的培养基中，选择MYP培养基作为毛头鬼伞菌丝体培养的最佳培养基。最适合毛头鬼伞菌丝体生长的温度为23--26℃，pH为6--8，最适合毛头鬼伞菌丝体生长的碳源和氮源分别为蔗糖和胰蛋白胨。 简介 毛头鬼伞属于伞菌目，毛头鬼伞是一种常见的真菌，在世界各地的都有分布，通常生长于草坪，乡间小路旁边以及荒野中。在毛头鬼伞的生长周期中，他会自溶，也就是说，毛头鬼伞会从伞盖的底部开始，逐渐向上溶解，最终成为一滩黑水。子实体能够促进毛头鬼伞的溶解，这一点已经被用来治疗肿瘤，据报道，毛头鬼伞子实体对肉瘤180和欧立希式癌的抑制率分别为100%和90%。毛头鬼伞中还含有优秀的（1-3）-β-葡聚糖，还含有一种具有抗氧化能力的巯基化合物，毛头鬼伞所具有的的抗氧化作用已经得到证明。另外，毛头鬼伞中还含有一种能够杀死线虫的化合物，并且毛头鬼伞味道鲜美，营养丰富，是世界粮农组织和世界卫生组织推荐的天然营养食用菌。在中国此前出版的各种文献中，收录了13个毛头鬼伞亚种，有文献报道，毛头鬼伞的最适生长温度为25℃。另外，在中国有许多农民也种植毛头鬼伞，俗称鸡腿菇。曾有人报道说毛头鬼伞液体培养基的最佳配方为：蔗糖：3%，玉米粉2%，麸皮4%，KH2PO4 0.1%，MgSO4.7H2O 0.05%，pH=8。此外，毛头鬼伞的栽培方式有：袋植栽培和床植栽培。用的主要的原料是棉籽壳，玉米棒子，水稻秸秆，以及尿素，牛粪和石灰等。最近几年，由于农村栽培技术的提高以及自动化控制技术的普及，食用菌的产量有了很大的提高，在1990年是55,274吨，2007年是146，346吨。然而，在韩国目前只有大约10种食用菌能够大规模种植，因此，我们应该学习中国蘑菇种植的先进经验，引进新的食用菌品种，增强我国（韩国）在食用菌行业的国际竞争力。 材料与方法 菌株与RAPD分析 在1996到2006的十多年间，我们从辽宁省农科院食用菌研究所得到了7种毛头鬼伞，他们各自的菌丝体都能够在PDA培养基上生长。为了进行RAPD分析，我们将毛头鬼伞的菌丝体接种到PDB培养基中进行静置培养，然后将培养好的菌丝体连同培养基一起转移到Whatman 2号滤纸上，真空中培养以除去残留的培养基，冻干并磨成冻干粉后加入液氮。取0.2g冻干粉，加入1ml的缓冲液并加入10ul的蛋白酶K。涡流混匀器上混匀2--3min，60℃反应1h，将混匀的混合液分装到4支1.5ml的离心管中，然后14000rpm离心10min。然后在含有500ulDNA模板的缓冲液中进行4个1min的循环。按照顺序，我们用800ul的75%的乙醇冲洗样品，14000rpm离心1min，再用300ul75%的乙醇冲洗，14000rpm离心1min，最后用100ul的洗脱液洗脱，14000rpm离心2min，最后通过电泳来测定洗脱液中DNA的浓度，然后用设计好的12个菌株的引物来进行PCR，PCR程序设定如下：94℃预变性5min，94℃变性1min，55℃退火1min，72℃延伸2min，35个循环，4℃保存。扩增出来的片段100V，用EB染色，1.8%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像系统照胶，然后通过UPGMA聚类分析软件进行进行RAPD分析。 最适培养基的筛选 我们从6种培养基中筛选一种最有利于毛头鬼伞菌丝体生长的培养基（见表1），在高压灭菌前调节pH=6，高压灭菌（0.15MPa，121℃）15min后，向每个平板中倒入大约20ml的培养基，然后用打孔器在生长有毛头鬼伞菌种的斜面上取菌种，接种到平板的中央，六种培养基依次接种，25℃培养9天然后拿出来评测菌丝体的生长情况。 表1毛头鬼伞菌丝体生长条件的筛选 温度对菌丝体生长的影响 为了测定温度对毛头鬼伞的影响，我们设置了6个温度梯度