7DNA文库的构建和目的基因的筛选详解.pptVIP

第十一章 DNA文库的构建和目的基因的筛选 Construction of DNA Library and Screening of Target Gene 定义和分类 基因文库指某个生物的基因组DNA或cDNA片段与适当的载体在体外通过重组后，转化宿主细胞，并通过一定的选择机制筛选后得到大量的阳性菌落（或噬菌体），所有菌落或噬菌体的集合。 按照外源DNA片段的来源，可将基因文库分为：基因组DNA文库（genomic DNA library）和cDNA文库（complementary DNA library）。 基因组文库：分离特定的基因、分析特定基因的结构、研究基因的起源与进化、基因的表达调控 cDNA文库：大规模基因测序、发现和寻找新基因、基因注释、基因表达谱分析、基因功能研究 DNA文库构建的基本程序 1、提取研究对象基因组DNA，制备合适大小的DNA片段，或提取组织或器官的mRNA并反转录成cDNA ； 2、DNA片段或cDNA与经特殊处理的载体连接形成重组DNA； 3、重组DNA转化宿主细胞或体外包装后侵染受体菌； 4、阳性重组菌落或噬菌斑的选择。 目标基因筛选方法 表型筛选法 杂交筛选和 PCR 筛选 免疫筛选法 酵母双杂交系统筛选 第一节 ?基因组 DNA 文库的构建 定义：指将某生物体的全部基因组 DNA 用限制性内切酶或机械力量切割成一定长度范围的 DNA 片段，