测序胶具体步骤和注意事项.doc

测序凝胶板的制备 1. 玻璃板的处理： 银染测序的玻璃板一定要非常清洁，一般先用温水和去污剂洗涤，再用去离子水冲洗玻璃板，除去残留的去污剂，最后用乙醇清洗玻璃板。玻璃板上遗留的去污剂微膜可能导致凝胶染色时背景偏高(棕色)。长玻璃板经粘合溶液处理可将凝胶化学交联于玻璃板上。这一步对于在银染操作过程中防止凝胶撕裂至关重要。 (1) 长玻璃板的处理 A. 在1ml 95%乙醇, 0.5%冰乙酸中加入5ml粘合硅烷(Bind Silane), 配成新鲜的粘合溶液。 B. 用经浸透新配的粘合溶液浸透的吸水棉纸擦拭仔细清洗过并已经自然干燥的玻璃板, 整个板面都必须擦拭。(用镜头纸蘸取亲和硅烷bind-silane溶液少许（1ml左右），涂在长玻璃板上。要将整块板都涂满、涂匀。) C. 4-5分钟后, 用95%乙醇单向擦玻璃板, 然后略用力沿垂直方向擦拭。重复三次这一清洗过程, 每次均须换用干净的纸, 除去多余的粘合溶液。冬天可能要放的时间更久一些，或者用电吹风吹一下。 [注意] 1. 在95%乙醇单向擦玻璃板时过度用力会带走过多的粘合硅烷, 使凝胶不能很好地粘附。 2. 准备短玻璃板之前要更换手套，防止粘染粘合硅烷。 3. 防止粘合溶液沾染在短玻璃板上是很重要的, 否则将导致凝胶撕裂。 (2) 短玻璃板的处理 A. 用适量（1.5ml左右）的浸透Sigmacote溶液（剥离硅烷溶液）的棉纸擦拭清洗过的短玻璃板。要将整块板都涂满、涂匀。 B. 5-10分钟后用吸水棉纸擦拭玻璃板以除去多余的Sigmacote溶液。 [注意] 用过的凝胶可在水中浸泡后用剃须刀片或塑料刮刀刮去。玻璃板须用去污剂完全清洗。或者凝胶用10% NaOH浸泡后除去。为防止交叉污染, 用于清洗短玻璃板的工具必须与清洗长玻璃板的工具分开, 如果出现交叉污染, 以后制备的凝胶可能撕裂或变得松驰。 亲和硅烷不可用于硅化玻璃容器天气气温低时，剥离硅烷有时会析出，涂板时会造成粘胶现象，因此当室内温度低于20度时，要首先将剥离硅烷预热到30-40度，玻璃用吹风机吹热才开始涂板。因为跑一次电泳比较费时费力，而亲和硅烷和玻璃硅烷使用条带与温度和个人的使用手法有关，因而在初次使用时，可以先涂完制胶后，直接分离测试一下，看结果是否理想。以免浪费时间和样本。特别是亲和硅烷，在没有完全凉干时就制胶，很溶液造成胶贴到另一边，分开时将胶弄破。