农药残留快速检测.doc

农药残留快速检测新技术的研究进展 摘要：农药残留的快速检测方法对食品安全、环境保护具有重要意义。本文综述农药残留免疫分析;生物传感器农药残留的检测方法大多以仪器分析为主，采用高效液相色谱法、气相色谱法、薄层色谱法、气质联用、液质联用等 由于农药品种多、化学结构和性质各异、待测组分复杂，高效、低毒、低残留农药品种不断涌现，在农产品中残留量很低，直接测定非常困难。为此需对样品前处理技术、分析检测技术、快速检测技术进行改进、开发和研究。 农药残留快速检测技术 近年来，一大批农药残留快速分析方法涌现出来，如酶抑制法、免疫分析法、生物传感器技术、生物活体测定技术、分子印迹技术等。 2.1 酶抑制法 酶抑制法是利用有机磷及氨基甲酸酯类农药可特异性地抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酯酶(AChE)的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死这一毒理学原理，将AChE 与样品反应，如果样品中没有农药残留或者残留量极少，AChE 的活性就不被抑制，反之，如果农药残留量比较高，AChE 的活性就会被农药所抑制。在酶反应试验中加入底物和显色剂观察颜色的变化或测定某种特定化合物反应的物理化学信号的变化，可判断是否存在有机磷或氨基甲酸酯类农药残留。目前，依据酶抑制法原理设计的农药残留检测方法主要有速测卡法（纸片法）、比色法（分光光度法）和胆碱酯酶生物传感器。 经过多年的酶抑制法研究开发和实践应用，中国先后颁布了2个国家标准和1个农业部行业标准，其中《GB/T5009.199—2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》[4]提供速测卡法（纸片法）和比色法（分光光度法）2种快速检测方法，《GB/T18630—2002蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯农药残留量的简易检验方法--酶抑制法[5]和《NY/T 448—2001 蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残留毒快速检测方法》[6]均为比色法（分光光度法）。 2.2 免疫分析法 免疫分析法是利用抗原与抗体特异性结合反应检测各种物质（药物、激素、蛋白质、微生物等）的分析方法。抗原是能够引起免疫反应的分子，它是形成特异性免疫反应的必备条件。一个完整的抗原应包括 2 个基本性质：一是免疫原性；二是反应原性（又称抗原性或免疫反应性）。具备这 2 种性质为完全抗原，仅具有反应原性的物质称为半抗原。农药是典型的半抗原，只有反应原性而无免疫原性，不能诱导抗体产生，只有将它们与大分子蛋白质载体结合，才能刺激机体免疫系统产生抗体。抗原和抗体的制备是免疫分析的关键和基础的步骤。制备抗原时，如果农药分子自身带有供偶联的活性官能团（如氨基、羧基等），则可将农药分子直接与蛋白质载体进行偶联反应，否则就必须对农药分子进行衍生化，接上供偶联反应的活性官能团以合成人工抗原。有许多因素直接影响到能否制备出高质量的人工抗原，如选择合适的中间体、活性官能团引入位点的选择、半抗原产物的分离、间隔臂的长短、半抗原与载体分子的偶联比等[7]。抗体制备主要有 3 种途径：动物免疫（多克隆抗体）、杂交瘤（单克隆抗体）技术和重组抗体技术。 根据标记物的不同，目前用于农药残留分析的传统免疫分析法主要有 4 种：放射免疫分析(RIA)、酶免疫分析/酶联免疫吸附分析(EIA/ELISA)、荧光免疫分析(FIA/PFIA)、化学发光免疫分析(CLIA)。其中，EIA/ELISA是最为常用的农药残留检测方法。 2.2.1放射免疫分析法（radioimmunoassay，RIA） 放射免疫分析法是使用以放射性同位素作为标记的抗原或抗体，用γ射线探测仪或液体闪烁计数器测定γ射线或β射线的放射性强度，来测定抗体或抗原量的技术。 徐德武等[]以3H标记莠去津建立的放射免疫测定法对土壤中莠去津添加回收率，沙土的添加回收率为85.7％—95.0％，壤土的添加回收率为86.9％—92.1％，表明此法对快速检测土壤中莠去津的残留具有的理论基础。胡秀卿等[]以14C-克百威建立了克百威的放射免疫测定法，方法最低检测量为0.175ng/ml，线性范围为0.256—4000.0ng/ml。在线性检测范围内,添加不同浓度克百威的蔬菜样品检测的批内、批间变异系数均小于10%，在甘蓝菜样品中的添加回收率试验回收率为93.0 %～104.0 % ,变异系数为4.3 %～11.5 %。并且认为此法用于测定蔬菜中克百威的残留是可行且可靠的。 放射免疫分析法尽管灵敏度非常敏锐，但是需要昂贵的计数器，存在放射线辐射污染问题，因此在农药残留分析中受到一定限制，并逐步为其他免疫分析方法所取代。 具有高度特异性和灵敏度的 EIA/ELISA 特别适合农药残留分析，自 1983 年之后得到了快速发展，由于避免必须使用放射性物质进行工作，而且可达到低检出限（最低检测限达到 10 -