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HPLC 常见故障分析及日常保养知识 Waters 能引起HPLC发生问题的潜在因素: 工作环境 电源及地线 流动相 泵 进样器 保护柱 在线过滤器 连接管路 色谱柱 检测器 数据处理装置 操作 逻辑判断及处理 问题 化学品 环境 仪器 *色谱柱/保护柱 *电源 *泵 *流动相 *地线 *进样器 *样品 *温度 *检测器 *湿度 *数据处理单元 *清洁程度 从最简单,容易之处入手: 如 1.停止流速; 2.去掉柱子; 系统冲洗 -- 去掉柱子和保护柱，用二通代替 1. 检查反压 - 应该为零或者很小; 2. 进空白 - 基线应无问题; 3. 检查基线状况; 基线问题分析 基线噪声 流动相内含有空气 - 脱气处理 检测池内有气泡 –冲洗检测池或增强检测出口背压（一般只适用UV检测器) 色谱柱内有未洗脱尽的组份 - 洗脱色谱柱 系统有漏液之处 - 检漏并处理 电噪声 - 去除噪声源, 信号线屏蔽, 检查系统接地状况 检测器光源灯能量低 - 更换光源灯 检测池污染 - 冲洗检测池 基线周期性噪声 绝大多数情况下是来源于泵的问题 泵头内有气泡 - 流动相脱气 ,泵头排气 泵进出口阀有问题 - 更换单向阀组件 柱塞杆有问题 - 更换柱塞杆及其密封圈 溶剂混合不良 - 加装混合器 电噪声 - 去除噪声源 非周期性噪声 气泡 - 流动相脱气 检测池内有气泡 - 流动相脱气, 检测池后加适当反压 系统有漏液之处 - 检漏并处理 溶剂混合不良 - 加装混合器 电噪声 - 去除噪声源 基线漂移 梯度系统 - 溶剂A于溶剂B的ABS值相差大 - 试用另种溶剂或使用基线扣除法 色谱柱有其他组份被洗脱出 - 冲洗, 直至基线稳定 溶剂发生变化 (如溶入气体或溶剂挥发) - 氦气或脱气机脱气, 溶剂瓶避光,密封(但要 注意防止溶剂瓶内产生负压) 系统有漏液之处 - 检漏并处理 环境温度影响 (尤其对示差,电导,电化学检测) - 室温,柱温,检测池温度控制 环境湿度影 对光检测器有较大影响 反压变化 - 溶剂和样品过滤. 注意黏度过大的样品 基线周期性波动 温度影响 - 环境温度及检测池温度控制. 注意空调的影响 溶剂混合不良 - 加装混合器 流动相脱气不良 - 流动相脱气 供电电源的影响 泵不良 – 检修泵 基线有无规律的尖峰 气泡 - 溶剂脱气 电路接触不良 - 保证清洁, 接线牢固, 接点无氧化 光源灯不良- 检查处理 电噪声 - 去除噪声源 脱气方法 在线脱气机脱气 氦气脱气 真空过滤脱气 注意: 溶剂应每天脱气 无样品峰 进样器未进样，样品瓶放置不正确或者未达到所需要样品量 泵未工作，没有流速或者流速变小 系统漏液 流动相或样品的问题 柱子或保护柱的问题 数据采集装置的问题或其与检测器连线的问题 最简单快捷的检查 - 泵是否工作, 系统是否漏液, 进一针丙酮溶液检查检测器读数及数据单元是否有响应 负峰 组份的ABS值小于溶剂的ABS值 气泡通过了检测池 对RI检测器不一定是有了问题，很可能是正常的 所有峰都是负峰 – 软件设置或者是检测器输出与数 据单元连线极性接反 峰形不好 - 如峰拖尾, 峰分叉, 出肩膀 在线过滤器(IN LINE FILTER)污染 (通常会伴随有系统压力升高之现象) 色谱柱污染 系统有不正常的死体积- 检查管路连接是否正确- 内径, 接头 保护柱(GUARD COLUMN)污染 溶剂不好或使用不对 样品不好 色谱柱坏了- * PH 2 或 8 会破坏柱子内的填料 * 流速变化率太大- 操作上应注意 在线过滤器装置 保护色谱柱的其他技术 在进样器与色谱柱之间的在线过滤器 样品的过滤（不能防护密封圈的脱落物） 通过固相提取（SPE）净化样品 干净的过滤芯 脏的过滤芯，反压高 保护柱污染 大多数的色谱柱变差的原因都是污染 使用保护柱可以增加色谱柱的使用寿命，使其10,000次进样 保护柱应当被认为是延长分析色谱柱使用寿命的一种划算的牺牲 保护柱的填料应该与分析色谱柱一致 实际上，设计、装填良好的保护柱将改善分析色谱柱的分离效率 色谱柱问题 所有的峰都有变化 色谱柱 连接 更换筛板 再生或者更换色谱柱 色谱柱被破坏 pH2, 键合相水解 pH8, 硅胶基质溶解 色