【2017年整理】培 养 基 配 制.docVIP

培 养 基 配 制 血平板：5%脱纤维绵羊血琼脂平板。英国Oxoid公司哥伦比亚琼脂（或TSA琼脂或脑心浸液琼脂）加热溶化后，高温高压灭菌，用时冷却至500C左右，加入无菌5-10%脱纤维绵羊血，充分轻摇混匀后，倾制平板，血平板厚4mm。 巧克力平板：应用马血或兔血制备，市售哥伦比亚琼脂热溶化后，高温高压灭菌，约在800C左右加入无菌血液配成5-10%，摇匀后置800C左右水浴中维持15分钟，使之成为巧克力色，絮状，取出冷却至500C左右倾制平板。因其中含有X和V因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好。若用绵羊血制备，则要加入X、V因子添加剂（按产品操作说明）。 庆大霉素血平板：（分离肺炎链球菌培养基） 哥伦比亚琼脂 250mL 绵羊血 12.5mL 庆大霉素 0.5mL 附：庆大霉素配法：4万单位+16mL水=2.5mg/mL 1万单位（u）=10mg 4万单位=40mg 杆菌肽巧克力平板：（分离流感嗜血杆菌培养基） 哥伦比亚琼脂 250mL 兔血（马血） 12.5mL 杆菌肽 lmL 附：杆菌肽配制：1.含760mg杆菌肽加10mL灭菌水。2. 250mL兔血巧克力加入1mL(76mg/mL)杆菌肽。杆菌肽最终浓度：0.3mg/mL(300mg/L) 万古霉素巧克力平板（分离流感嗜血杆菌培养基） 哥伦比亚琼脂 250mL 兔血（马血） 12.5mL 万古霉素 1.0mL (5mg/250mL) 附：万古霉素配制法：（去甲万古霉素400mg/瓶，相当500mg/瓶万古霉素，分装80支） 一瓶400mg去甲万古霉素加0.85％NaCl 10mL=50mg/mL 1mL万古霉素（50mg/mL）加0.85％NaCl 9mL=5mg/mL 高盐甘露醇琼脂：（分离金黄色葡萄球菌培养基） 蛋白胨 10g 牛肉浸膏 1g 氯化钠 7g 琼脂 15g 水 1000mL 甘露醇 10g 0.2%酚红 25mL 煮溶后调pH7.4，冷却用大试管倾倒斜面保存。 吕氏血清培养基：（分离白喉棒状杆菌用） 1. 1%葡萄糖肉汤（pH 7.6）100mL 2. 无菌动物血清（牛、羊、猪）300mL 肉汤与动物血清混合，分装于无菌试管，每管5mL，在血清凝固器或流动蒸汽灭菌器内灭菌制成斜面。 灭菌方法： 第一天：800C1小时 第二天：850C1小时，于370C过夜 第三天：900C1小时，于370C过夜 亚碲酸钾琼脂：（分离白喉棒状杆菌用） 1 pH7.6肉汤琼脂 100mL 2 10%葡萄糖肉液 2mL 3 1%亚碲酸钾溶液 4.5mL 4 0.5%胱氨酸水溶液 1mL 5 脱纤维绵羊血 5～10mL 先将肉浸汤琼脂溶化后，待冷至500C左右，无菌加入已灭菌的葡萄糖，亚碲酸钾和胱氨酸溶液、血液混匀后倾注平板。 气管分泌物标本运送培养基（Transportation medium） TSB大豆培养基 3g 葡萄糖 0.5g 脱脂奶粉 2g 甘油 10mL 蒸馏水 100mL 先将1、2项加入温水中煮溶后，再加脱脂奶粉，摇匀，再煮沸，最后滴加甘油，每管1.0-1.5mL分装进塑料小管。 大便转送培养基 ①甘油盐水保存液： 无水磷酸氢二钾 3.1g 无水磷酸二氢钾 1g 氯化钠 4.2g 甘油 300mL 0.1%酚红溶液 10mL 蒸馏水 700mL 先将盐类溶于蒸馏水中，加入甘油，充分混匀。调pH7.2，再加入酚红。每管4mL分装于大试管中， 1210C15分钟灭菌后备用。 ②磷酸盐缓冲盐水（PBS）（小肠结炎耶尔森氏菌标本冷增菌） Na2HPO4 8.23g Na2HPO4·H2O 20g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL 将上述成分溶于蒸馏水中，调pH7.6，每管10mL分装，高压1210C15分钟，置于冰箱备用。 ③改良磷酸盐缓冲盐水（SB） 在1000mLPBS中加入山梨醇10g，胆盐1.5g，溶解后，每管10mL分装，高压1210C15分钟，置于冰箱备用。 ④霍乱弧菌增菌转送培养基