实验1、2、3微生物实验基本操作.pptVIP

微生物学实验 实验一 微生物实验规则与安全、无菌概 念及无菌操作技术的介绍 实验二 培养基的制备 实验三 消毒与灭菌 一. 微生物实验规则与安全 轻松的心态，认真的实验态度 微生物实验的特殊性 ------- 把所有的微生物都看成是具有潜在致病性 充分预习 -------了解实验目的、原理和方法，实验中要思路清楚 实验记录 -------观察的结果或现象，分析 实验报告 1. 实验目的和原理 2. 实验材料 3. 实验方法或步骤 4. 实验结果或绘图 5. 思考题 实验操作应严格按操作规程进行 有机溶液或溶剂不要接触火源，如乙醚或丙酮等 （酒精灯的使用） 使用一些贵重仪器：显微镜，灭菌锅、电泳装置、凝胶成像仪等，要细心操作，特别爱护 称量药品时严禁药匙交叉使用，也严禁取出的药品又倒回药瓶中，造成污染 嘴吸取试剂或菌液？遇有盛菌的试管或试剂瓶打破要及时报告 …… 二. 无菌概念及无菌操作技术 无菌概念 ------实际上只是一种习惯用语，因为实验，科研，或生产实践中使用的微生物必须是单一的纯种或菌株，也就是除实验用菌外，无其他杂菌的污染。 介绍器具的使用： ------ 标记，接种环，培养皿，涂布棒，接种等，超净台的使用，培养皿的倒置，斜面的形成 实验二 培养基的制备 一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。 原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 ------目前可培养微生物仅占微生物总量的1%左右 牛肉膏蛋白胨培养基：一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。 高氏I号培养基（Gause I）：培养和观察放线菌形态和特征的合成培养基。 马铃薯培养基（PDA）：培养基是分离真菌和细菌的常用培养基。用于培养霉菌的加入蔗糖，用于培养酵母菌的加入葡萄糖。 2216E培养基：分离海洋微生物的培养基配方 蛋白胨 5克  酵母膏 1克  磷酸高铁 0.01克  琼脂 15-----20克 （固体培养基）  陈海水 1000毫升 （已过滤） 煮沸氢氧化纳（5%）的溶液调PH值7.6—7.8 LB: (溶菌肉汤，lysogeny broth）：培养的菌种一般是经过改造的无法在外界环境单独存活和扩增的工程菌。通过培养工程菌，我们可以表达大量的外源蛋白，也可以拿到带有外源基因的质粒。 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L 氯化钠(NaCl) 5g/L 补水至1000ml 根据经验值用NaOH调节该培养基的pH---7.4 (该pH适合目前使用最广的原核表达菌种E.coli的生长) 三、注意事项 调pH: 1mol/L NaOH，1mol/L HCl 避免回调----影响培养基内各离子的浓度 定容 分装：液体----试管(管高）1/4， 三角瓶（容积）1/2 固体----试管（斜面）1/5，三角瓶1/2 半固体---- 试管1/3 Gause I: 淀粉先用冷水调成糊状后加入沸水中使之完全溶解，然后按配方顺序依次溶解各成分（磷酸盐和镁盐混合易产生沉淀）。 PDA: 用土豆应去皮切小块，避免带入杂质，产生泡沫，影响通气。 灭菌：含糖培养基用0.06MPa，112℃ ，15min或将其他成分先行灭菌0.1MPa， 121℃ ，20min 实验三 消毒与灭菌 消毒---- 指消灭病原菌和有害微生物的营养体，但不一定能杀死细菌芽孢的方法 灭菌---- 指消灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子。 灭菌的类型 干热灭菌：利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌。 160~170 ℃ ，1~2h 高压蒸汽灭菌：增加锅内压力，使沸点增高，高于100 ℃ ，导致细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌 蛋白质含水量增加 湿热穿透力大 蒸汽有潜热 紫外线灭菌：波长200~300nm， Thymine dimer（胸腺嘧啶二聚体，TDdimer），O2---O3 紫外线对细菌、病毒的杀菌作用一般在一秒内完成，而对臭氧方法来说，要达到紫外线的效果一般需要 20分钟至一小时的时间 过滤除菌：微孔滤膜过滤器 -