科兴生物工程有限公司基因工程注射用重组人干扰素及口服固体制剂产业化项目环境评估报告书.doc

深圳科兴生物工程有限公司基因工程注射用重组人干扰素及口服固体制剂产业化项目 环境影响报告书(报批稿简本) 建设单位：深圳科兴生物工程有限公司 二零一二年10月建设项目概况 建设项目的地点及相关背景 深圳科兴生物工程有限公司前身是成立于1989年的深圳科兴生物制品有限公司，是一家内资高新技术企业，主要从事生物医药产品的研发、生产和销售。公司总部位于深圳市南山区科技园中区，是中国最大的基因工程产业化基地，具有良好的技术和管理人才。目前主要生产赛若金SINOGEN（重组人干扰素α1b）、悦康仙RecoSun（重组人白细胞介素-2）、苏咪啉Sumilin(重组人胰岛素)和赛高路Sigrow(重组人生长激素)。 公司首个产品—重组人干扰素α-1b是由国家高科技“863计划”生物领域首席科学家侯云德教授开发研究成功的世界上第一个用中国人基因克隆表达的基因工程药物，是国家一类新药，其商品名为“赛若金”。经过十多年的大规模生产及技术改进与提高，深圳科兴公司生产的赛若金作为中国民族生物工程产业的象征，已经在干扰素市场确立了盟主的地位。 深圳科兴生物工程有限公司拟在深圳市宝安区沙井街道办向兴路与新建松福路交汇处（中熙工业园对面）投资3000万元新建“基因工程注射用重组人干扰素及口服固体制剂产业化项目”，建设生产厂房、生产线及公用工程等配套设施，项目建成后，年产注射用重组人干扰素α1b 2000万支/年、替诺福韦酯片剂2000万片/年、替比培南酯颗粒剂2500万包/年。 行业类别：根据《建设项目环境影响评价分类管理名录》（中华人民共和国环境保护部令 第2号 图3.1-1注射用重组人干扰素α1b的生产工艺流程及产污环节生产主要包括细菌培养和纯化(初纯和精纯)两部分，首先通过二级、三级种子扩增,直到2000L规模的细菌培养罐进行培养，经离心得到培养菌体，细菌破菌、分离后得到粗制品，粗制品经层析纯化得到目的蛋白质。具体工艺流程介绍如下。 （1） 一代种子（大肠杆菌）的培养：将-70℃保存的甘油工作种子接种在50ml种子培养液中，37℃摇床培养。目的为获得足够量的活跃基因工程菌进行大规模培养。 （2） 二代种子：将50ml一代种子培养液接种至10L种子罐继续扩大培养，以期获得5L的二级种子液 （3）将5L二代种子培养液接种至150L种子罐继续扩大培养，以期获得87.5L的三级种子液进行2000L大罐发酵，87.5L种子液才能保证2000L罐接种密度达到工艺要求，以保证发酵成功。 （4）2000L大罐发酵：用酵母粉、硫酸铵、磷酸盐及纯化水配制成1250L培养液，在2000L发酵罐中灭菌后冷却到37℃，并将87.5L种子液接入，37℃搅拌培养，获得足够量的基因工程菌，培养结束后菌体中含有表达的目的蛋白。 以上种子发酵过程均向发酵罐夹层通入蒸汽间接加热。 发酵过程是耗氧发酵，10L、150L种子罐和2000L发酵罐产生发酵废气(G1-1、G1-2、G1-3)，主要成分是CO2,发酵废气经过滤除菌后排放。 （5）离心收集菌体：因目标蛋白在细菌中，用连续流管式离心机将培养液和细菌分离，获得细菌进行下一步处理。产生离心上清液（W1-1），即发酵废液，1553.5Kg /批，进入有菌废液杀菌罐121 ℃灭菌后排入污水处理装置，主要污染物是残留的细胞培养代谢残留物碳、氮有机物和一些无机盐。 （6）初纯-菌体破碎分离： 菌悬液通过高压匀浆破碎细菌。将细菌内的目标蛋白释放，依次使用HCl和硫酸铵将细菌碎片、不溶性微粒、杂蛋白及核酸等杂质沉淀，离心废弃。最后用硫酸铵盐析，使目标蛋白沉淀，离心收集沉淀，得到粗制品，进行下一步层析纯化。 该过程存在氢氧化钠和盐酸发生的中和反应，反应方程式如下： 初纯破菌分离后产生上清废液（W1-2）1693.182Kg /批次，主要污染物是高浓度的硫酸铵、细胞培养代谢残留物碳、氮及酸碱中和产生的氯化钠等。离心废弃的固体废物80Kg/批（S1-1、S1-2、S1-3），主要成分是细胞碎片，含少量糖类及蛋白质等有机物。 （7）精纯-层析纯化：包括层析1、2、3、4，用醋酸钠、Tris、NaCl、磷酸盐缓冲液、NaOH等溶液冲洗层析柱，利用分子量、电荷的差异等对不同的蛋白进行分离纯化，最后得到纯度为95%以上的目标蛋白原液。 精纯-层析产生层析废水（W1-3），废水量1999.012Kg/批次，主要污染物是醋酸钠、磷酸盐、NaCl等无机盐、Tris、NaOH、土温（Tween-20）等，还有极少量的杂蛋白、核酸等有机物。 （8）制剂、分装、冻干、轧盖、包装：将纯化后的目标蛋白按照制剂要求配方，除菌过滤后进行无菌灌装，再进行冷冻干燥（冻干），去除水分，轧盖、包装后得到成品。分装系统用氢氧化钠溶液清洗，每批产