第章复制＝.pptVIP

第三章 DNA复制 DNA Replication 第一节 DNA的复制概述 1 DNA的半保留复制 2 复制单位、起点和复制方式 3 复制速度 4 引物 5 DNA的半不连续复制 1.1 概念 复制时，DNA两条链解开，以每条链为摸板，按碱基互补配对原则合成互补链，形成的两个子代DNA分子与原来的亲代DNA分子完全相同，每个子代DNA分子中一条链来自亲本，一条链为新合成的。 DNA分子上每一条链都含有合成它的互补链所必需的全部遗传信息 半保留复制是双链DNA普遍采用的复制机制 在半保留复制中碱基配对是核酸分子间传递遗传信息的结构基础 DNA分子在代谢上是稳定的 2、复制单位、起点和复制方式 2.1　复制单位：复制子 A unit of the genome in which DNA contain a region from origin（复制起点） to terminus（复制终点）. 基因组中能独立复制的单位 原核生物单复制子，真核生物多复制子 真核生物染色体DNA 线性双链 多复制子 病毒DNA 形态多样（环形、线形、双链或单链） 复制方式多样（双向、单向、对称或不对称） 生物染色体多为双向对称式复制 例外：Bs—双向，但两复制叉移动距离不同 滚动环式（噬菌体X174DNA）和D－环式（线粒体DNA）是单向复制的特殊形式。 3 复制速度 真核生物复制叉移动的速度～1000-3000bp/min; 原核生物复制叉移动的速度～50,000bp/min 真核生物比原核生物慢? （复制时解开核小体，复制后又重新形成核小体） 4、引物（primer） 所有DNA聚合酶均不能起始DNA的合成 引物是一段同模板DNA配对的短核酸序列，为DNA合成提供3’-OH末端 引物 RNA引物（多数） DNA引物 引物蛋白 5.2 概念：DNA复制时，前导链的合成是连续的,而后随链的合成是不连续的，这种复制方式称为半不连续复制 底物: dNTP(dATP,dGTP,dCTP,dTTP) 模板:　单链的DNA母链 RNA引物:　寡核苷酸 (10nt－60nt) DNA聚合酶: 其他酶和蛋白因子:引物酶、解链酶，解旋酶，单链结合蛋白，连接酶　　 2 E.coli DNA复制的酶体系 DNA聚合酶 解螺旋酶 单链结合蛋白 拓扑异构酶 引物合成酶 连接酶（岗崎片段） 2.1 DNA聚合酶 催化核酸链的延长反应 以4种dNTP为底物 反应需接受模板指导 链延伸需有引物3’-OH存在 链延伸方向为5’-3’ 产物DNA极性与模板相对 需Mg离子存在 5’至3 ’的聚合活性（ 5 ’ → 3 ’ ）：3’－OH对dNTP的α－磷酸进行亲核攻击，形成3 ’ ，5 ’ 磷酸二酯键。 3 ’ →5 ’外切酶活性：正常复制时该活性很低，一旦出现错配的碱基，聚合反应停止，3’→5’外切活性将错配的核苷酸切除----校正作用； 核酸外切酶活性 DNA聚合酶催化反应的特点 以单链DNA为模板 以dNTP为原料 引物提供3′-OH 聚合方向为5′→3′ 2.2 解螺旋酶 (helicase) 通过水解ATP获得能量打开DNA双链。每解开一对碱基需要水解2个ATP分子。 E.coli 解旋酶主要为：DnaB和Rep蛋白 DnaB: 沿5’-3’方向，结合于滞后链模板 Rep蛋白：沿3’-5’方向，结合于前导链模板 2.3 单链DNA结合蛋白 (SSB) 与分开的单链DNA结合，防止它们再接触并重新结成碱基对，起着稳定解开的单链，阻止复性和保护单链部分不被核酸酶降解。 2.4 DNA拓扑异构酶 (topoisomerase) 兼有内切酶和连接酶的活力, 既能水解，又能连接磷酸二酯键. 拓扑异构酶?：使DNA一条链发生断裂和再连接。作用是松解负超螺旋，反应不需要能量。 拓扑异构酶Π：使DNA两条链发生断裂和再连接。当引入负超螺旋时需要由ATP提供能量。 2.5 引物酶和引发体 引物酶 (primase): 依赖DNA的RNA聚合酶。 催化RNA引物的合成。 在大肠杆菌，引物酶是dna G基因的产物。 RNA引物： 　　在DNA模板的复制起始部位由引物酶催 化NTP的聚合，形成短片段的RNA，为DNA 聚合提供3′-OH末端。 引发体 (primosome) 由Dna B、Dna A、Dna C以及其他复制因子一起形成复合体，再结合引物酶形成较大的聚合体，结合到模板DNA上。 复制开始时，在引发体的下游解开双链，再由引物酶催化引物的合成。 2.6、DNA连接酶(ligase) 3　原核生物DNA的复制 3.1、复制的起始(initiation) ——复制起