分子荧光方法要点.ppt

分子荧光分析方法 制作人：杨文丽 第一节 概述 一、分子荧光的定义及发展 二、分子荧光的特点及应用 三、分子荧光与紫外—可见分光光度法的异同 第二节 分子荧光法的基本原理 一、荧光的产生 二、激发光谱和荧光光谱 三、荧光与物质的分子结构 激发光谱与荧光（发射）光谱 一、荧光的检测 光源发出的紫外可见光通过激发单色器分出不同波长的激发光，照射到样品溶液上，激发样品产生荧光。样品发出的荧光为宽带光谱，需通过发射单色器分光后再进入检测器，检测不同发射波长下的荧光强度F。由于激发光不可能完全被吸收，可透过溶液，为了防止透射光对荧光测定的干扰，常在与激发光垂直的方向检测荧光（因荧光是向各个方向发射的）。 荧光激发光谱与荧光（发射）光谱 1.激发光谱excitation spectrum：将激发荧光的光源用单色器分光，连续改变激发光波长，固定荧光发射波长，测定不同波长激发光下物质溶液发射的荧光强度 (F ) ，作F —λ光谱图称激发光谱。 从激发光谱图上可找到发生荧光强度最强的激发波长λex，选用 λex可得到强度最大的荧光。 荧光激发光谱与荧光（发射）光谱 2. 荧光光谱fluorescence spectrum：选择λex作激发光源，用另一单色器将物质发射（发射光谱） 的荧光分光，记录每一波长下的 F，作 F - λ 光谱图称为荧光光谱。