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趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12在口腔鳞状细胞癌细胞增殖和迁移中的作用 　　[摘要] 目的 检测趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12在口腔鳞状细胞癌细胞中的表达及其在肿瘤细胞增殖和迁移中的作用。方法 采用逆转录聚合酶链式反应和Western blot法检测20例口腔鳞状细胞癌组织、颈部淋巴结组织、舌鳞状细胞癌细胞株Tca8113、颊鳞状细胞癌细胞株Bca885和10例正常口腔黏膜组织中CXCR4的表达，采用逆转录聚合酶链式反应检测CXCL12的表达，通过MTT法检测细胞的增殖能力，通过趋化实验观察CXCR4特异性配体CXCL12对口腔鳞状细胞癌细胞的趋化迁移作用。结果 1）在口腔鳞状细胞癌组织、Tca8113细胞及Bca885细胞中，CXCR4 mRNA的相对表达量分别为2.31±1.13、1.89±1.20、1.67±1.10，CXCR4蛋白的相对表达量分别为1.36±0.15、1.85±0.34、1.97±0.23，正常口腔黏膜组织在mRNA及蛋白质水平均未检测到CXCR4表达。口腔癌患者颈部淋巴结组织中，CXCL12 mRNA表达量的平均值为1.14±0.87，而口腔鳞状细胞癌组织和正常口腔黏膜组织未检测出CXCL12的表达。2）口腔鳞状细胞癌细胞在CXCL12作用下增殖反应明显增强，CXCR4抗体可明显抑制肿瘤细胞的增殖。3）趋化实验显示CXCL12可诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生明显迁移，在30～100 ng?mL-1的范围内，诱导口腔鳞状细胞癌细胞迁移的作用呈明显量效关系。结论 CXCR4/CXCL12受体配体系统可介导口腔鳞状细胞癌细胞的增殖和迁移，在癌细胞向颈部淋巴结转移中发挥着重要作用。 　　[关键词] 口腔鳞状细胞癌； 趋化因子受体； 增殖； 迁移 　　[中图分类号] R 730.2 [文献标志码] A [doi] 10.7518/hxkq.2013.01.003 口腔鳞状细胞癌（oral squamous cell carcinoma，OSCC）是发生于口腔黏膜的鳞状细胞癌，具有局部侵袭力强且易向颈部淋巴结转移的特点，而颈部淋巴结转移对患者的预后影响很大。趋化因子是一种能够结合到靶细胞上的特异性G蛋白偶联受体的化学诱导因子，参与调节生理性和病理性白细胞迁移。研究[1]发现，趋化因子及其受体与肿瘤侵袭、转移密切相关，尤其是趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12相互作用所构成的反应轴在多种肿瘤的发生、增殖、分化和器官特异性转移中发挥着重要作用[2-4]。已有研究[5-7]表明，不同的肿瘤细胞可表达趋化因子受体CXCR4，而其配体CXCL12则高表达于癌细胞转移相关部位。它们不仅与肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭密切相关，而且有可能成为肿瘤治疗的一个新靶点。本课题组在以前的实验[8]中已经证实，趋化因子受体 　　CXCR4在口腔鳞状细胞癌中有表达，并与口腔鳞状细胞癌淋巴结转移有关。为了进一步了解趋化因子受体CXCR4及其配体CXCL12在口腔鳞状细胞癌细胞增殖和迁移中的作用，本研究检测了口腔鳞状细胞癌组织、舌癌细胞株Tca8113、颊癌细胞株Bca885中CXCR4以及口腔鳞状细胞癌组织及其颈部淋巴结组织中CXCL12的表达，并对其增殖、趋化和迁移活性进行相应分析，以期为CXCR4和CXCL12诱导口腔鳞状细胞癌细胞定向迁移提供实验依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 研究对象和标本来源 　　1.1.1 细胞株和主要试剂 口腔鳞状细胞癌细胞株Tca8113和Bca885均购自四川大学口腔疾病研究国家重点实验室，用含10%新生小牛血清（fetal bovine serum，FBS）的RPMI1640培养液培养。二甲基亚砜 　　（dimethyl sulfoxide，DMSO）、MTT液（Sigma公司，美国）；鸟类成髓细胞白血病病毒（avian myeloblastosis virus，AMV）逆转录酶、Taq NDA多聚酶（Takara公司，日本）；CXCL12（Cytolab公司，美国）、兔抗人CXCR4抗体（RD公司，美国）。趋化小室与8.0 μm孔径多聚碳酸酯膜（Neutroprobe公司，美国）。 　　1.1.2 临床标本 选取2010年7月至2011年7月在宁夏回族自治区人民医院住院手术治疗的20例口腔鳞状细胞癌患者，采集标本进行研究。20例患者中，男性13例，女性7例；年龄19～81岁，平均60岁；按国际抗癌联盟（Union for International Cancer Control， 　　UICC）（2002年）标准进行分期，Ⅱc期4例，Ⅲa期7例，Ⅲb期4例，Ⅲc期5例。20例患者中，分别取其颈部淋巴结组织各1枚（共20枚），其中14枚为转移淋巴结组